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1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文解脂耶氏酵母脂肪酶Lip1基因的密碼子優(yōu)化及功能表達(dá)姓名:張黎申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:閆云君20110121II華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文pastisGS115中進(jìn)行功能性表達(dá),發(fā)酵測酶活,結(jié)果表明:密碼子優(yōu)化后基因表達(dá)水平相對于出發(fā)基因有較大提高,且優(yōu)化后組成型表達(dá)水解酶活達(dá)8.07UmL,明顯優(yōu)于誘導(dǎo)型表達(dá)。同時(shí),通過SDSPAGE電泳驗(yàn)證脂肪酶分子量大小,在53kDa處有一特異條
2、帶。對酵母工程菌GS115pGAP9KMlip1發(fā)酵條件進(jìn)行初步優(yōu)化,確定其最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基,優(yōu)化結(jié)果為最適YP(酵母膏蛋白胨)含量為3(YP),最適碳源為油酸。4.對Lip1酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究,結(jié)果表明:Lip1對短鏈的對硝基苯酚酯有較強(qiáng)的水解活性,其最適底物為pNPB(C4),最適pH為8.5,最適溫度為45℃。在60℃的恒溫水浴條件下溫浴2h后殘余酶活為35.88%;金屬離子對脂肪酶Lip1活力影響實(shí)驗(yàn)表明,Mg2、Fe2和Zn
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