新型磷酸酶MTMR14對(duì)哮喘和心肌肥厚的影響.pdf

1、MTMR14是一種新型磷酸酶，它最特異的生物學(xué)底物是磷酸肌醇而不是蛋白質(zhì)。MTMR14在骨骼肌、睪丸、氣管平滑肌和心臟中高表達(dá)，該基因的缺失將導(dǎo)致一系列疾病，如中央核肌病、骨骼肌細(xì)胞衰老、動(dòng)脈粥樣硬化，肌肉疲勞和肌無(wú)力等。然而，MTMR14在哮喘和心肌肥厚中的作用尚不清楚。
　　本研究分為兩個(gè)部分：第一部分：MTMR14對(duì)哮喘的影響。我們用雞卵清白蛋白(OVA)致敏小鼠，以建立21天急性哮喘模型，并對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示：與對(duì)照組

2、小鼠相比，哮喘小鼠發(fā)生氣道炎癥和氣道重塑。Real-time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：MTMR14在哮喘小鼠的氣管平滑?。ˋSM），支氣管平滑肌（BSM）和肺（Lung）中下調(diào)表達(dá)。進(jìn)一步免疫組化結(jié)果顯示：MTMR14在哮喘小鼠的氣管中下調(diào)表達(dá)。全細(xì)胞內(nèi)鈣檢測(cè)結(jié)果顯示：MTMR14的缺失導(dǎo)致氣管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣增加。值得一提的是，我們用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在 MTMR14野生型（MTMR14 WT）小鼠的氣管平滑肌細(xì)胞中檢測(cè)到了L-型鈣電流（VD

3、LCC），而在MTMR14基因敲除型（MTMR14 KO）小鼠的氣管平滑肌細(xì)胞中卻沒(méi)有檢測(cè)到VDLCC電流。這一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：MTMR14的缺失可能導(dǎo)致哮喘。第二部分：MTMR14對(duì)心肌肥厚的影響。我們成功從乳鼠心臟分離出原代心肌細(xì)胞。免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示：原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞純度很高，接近100％。Real-time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Ang II處理原代心肌細(xì)胞48 h后，ANP, BNP和β-MHC均上調(diào)表達(dá)，表明心肌肥厚模型建立

4、成功。接著，我們以 H9C2心肌細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。在mRNA水平，我們通過(guò)RT-PCR技術(shù)，檢測(cè)MTMR14在H9C2中表達(dá)情況；在蛋白水平，通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)證明MTMR14在H9C2中表達(dá)。Ang II處理H9C2細(xì)胞48 h后，Real-time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：ANP, BNP和β-MHC均上調(diào)表達(dá)；免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：心肌細(xì)胞表面積增大，表明心肌肥厚模型建立成功。全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)顯示：肥厚的H9C2細(xì)胞中，VDLCC電流