不同類型高血壓時血管平滑肌鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶活性變化及肥厚心肌的電學特征比較.pdf

1、目的：高血壓病是目前的常見病和多發(fā)病，但其發(fā)病機制尚不十分清楚。有人認為，血管平滑肌(vesselsmoothmusclecell，VSMC)尤其是阻力血管平滑肌的持續(xù)收縮，導致肌張力增加是原發(fā)性高血壓的發(fā)病基礎。血管平滑肌的活動主要是通過胞內(nèi)Ca2+濃度的變化，觸發(fā)肌球蛋白輕鏈磷酸化和脫磷酸化，從而引起平滑肌的收縮和舒張?，F(xiàn)已明確，肌球蛋白輕鏈激酶是VSM肌球蛋白輕鏈磷酸化最重要的限速酶。鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin，CaN

2、)是肌球蛋白輕鏈脫磷酸化的限速酶。肌球蛋白的磷酸化和脫磷酸化分別引起血管平滑肌的收縮與舒張。有研究表明原發(fā)性高血壓時，阻力血管的鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)活性下降，這一特征是否為其它類型高血壓所共有尚未見報道。另外，心肌肥厚是高血壓病常見的并發(fā)癥，是對慢性壓力負荷的一種適應性反應，左心室肥厚常引起左心室流出道形態(tài)的變化。我們過去的研究發(fā)現(xiàn)，豚鼠、家兔及大鼠左心室流出道(主動脈前庭)均可引出自發(fā)性電活動，其慢電位特征與竇房結(jié)優(yōu)勢起搏細胞相似

3、。肥厚心肌左室流出道的這一改變是否能引起左室流出道自律性電活動改變，尚未見報道。為此，本課題的研究目的在于：(1)探討并比較自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和鹽性高血壓大鼠(SDsa)發(fā)病機制中不同年齡不同血管平滑肌CaN活性特征；(2)探討并比較心肌肥厚時左室流出道區(qū)域自發(fā)節(jié)律發(fā)生頻率，并通過測定靜息電位(最大舒張電位)、動作電位幅值、0相去極速度、動作電位復極至50％和90％時程及自發(fā)放電頻率等指標，觀察該區(qū)域快、慢電位特征；(3)探討并

4、比較心肌肥厚時，SHR和SDsa左心室心肌Na+-K+-ATPase活性特征。為高血壓及其心臟并發(fā)癥的臨床治療提供新的理論依據(jù)。 方法：(1)將大鼠擊頭致昏，斷頭放血，迅速取胸主動脈(A)、腸系膜動脈(MA)和尾動脈(CA)，將血管周圍結(jié)締組織分離干凈，稱重后立即置于液氮中速凍5min，取出后剪碎，置入預冷的勻漿緩沖液中，用玻璃勻漿器勻漿，勻漿液在4℃以14,000轉(zhuǎn)/分離心30min，收集上清液，取少量考馬斯亮蘭法測蛋白含量，

5、其余作CaN活性測定。(2)大鼠擊頭致死后，迅速取出心臟，取流出道組織，采用玻璃微電極細胞內(nèi)記錄法測定左室流出道電活動，描記靜息電位(RP)(慢電位為最大舒張電位，MDP)、動作電位幅值(APA)、0相最大除極速度(Wmax)、復極至50％(APD50)和90％時間(APD90)和自發(fā)放電頻率(RPF)。(3)將鼠擊頭致昏速取心臟，冷生理鹽水沖洗，取約100mg心肌組織，加入4℃的勻漿緩沖液，勻漿，以10,000轉(zhuǎn)/分，上下緩慢勻漿3～

6、5次，然后用4層紗布過濾，濾液以4℃10,000轉(zhuǎn)/分離心20分，棄上清液，沉淀部測定Na+-K+-ATPase活性。 結(jié)果：(1)12周、16周Wistar大鼠A、MA和CA的CaN活性組間無顯著差異(P＞0.05)；但16周Wistar大鼠各組CaN活性均高于12周(P＜0.01)。(2)12周SHR大鼠MA的CaN活性為2.02±0.08U/mg.pro.h，明顯低于同組的A及CA(P＜0.01)；16周SHR大鼠MA的C

7、aN活性為1.98±0.20U/mg.pro.h，明顯低于同組的A及CA(P＜0.01)，但與12周SHR大鼠相比MA活性無顯著差異。(3)12周、16周SD大鼠CA的CaN活性明顯低于同組的A和MA的活性(P＜0.01)；但16周與12周SD大鼠相比CA的CaN活性無顯著差異；16周A的CaN活性為2.80±0.20U/mg.pro.h，明顯高于12周A的CaN活性2.32±0.17U/mg.pro.h(P＜0.05)。(4)12周、

8、16周SDsaCA的CaN活性明顯低于同組A和MA的活性(P＜0.01)；但與SD對照組無顯著差異。16周SDsaA的CaN活性為2.99±0.28U/mg.pro.h，明顯高于12周SDsaA的CaN活性2.56±0.22U/mg.pro.h(P＜0.05)。(5)SDsaCA的CaN活性12周為1.53±0.16U/mg.pro.h、16周為1.77±0.06U/mg.pro.h，明顯低于SHR12周為3.20±0.14U/mg.p

9、ro.h、16周為3.18±0.14U/mg.pro.h(P＜0.01)。(6)SHR經(jīng)電刺激引出了自律性電活動的發(fā)生率為88.9％，明顯高于Wistar鼠發(fā)生率(28.6％)和SD大鼠發(fā)生率(25％)，而SDsa無一例誘發(fā)出自發(fā)電位，明顯低于其它鼠。(7)SHR的自發(fā)快、慢電位的APD、APD50和APD90的時間都明顯長于Wistar大鼠，有顯著性差異(P＜0.01)；SHR白發(fā)放電頻率變異較大，最快233次/分，最慢為16次/分。

10、而Wistar大鼠比較穩(wěn)定為126±8次/分。(8)Wistar大鼠誘發(fā)電位各指標與SD大鼠各指標均無顯著差異；SHR表現(xiàn)為APD235.2±9.8ms、APD5070.8±4.4ms和APD90138.3±9.5ms，均明顯長于兩種正常對照組(P＜0.01)。SDsa與SD鼠相比，Vmax76.54±5.3mv/s、APD127.3±9.5ms和APD9078.3±6.4ms，明顯減小(P＜0.01)。另外，SDsa誘發(fā)電位的APD、

11、APD50和APD90明顯小于SHR(P＜0.01)。(9)不同大鼠右室濕重與體重之比(RVW/BW)無明顯差異；SHR的左室濕重與體重之比(LVW/BW)明顯高于Wistar(P＜0.01)；SD和SDsa大鼠12周LVW/BW無明顯差異，而16周SDsa大鼠明顯高于SD大鼠；SHR的LVW/BW12周為3.55±0.22、16周為3.65±0.42，明顯高于SDsa12周為2.61±0.25、16周為2.86±0.17(P＜0.01

12、)。(10)SHR、SDsa心肌細胞膜Na+-K+-ATPase活性分別為15.82±0.25μmolPi/mg.pro.h和15.7±0.88μmolPi/mg.pro.h，明顯低于Wistar和SD大鼠的心肌細胞膜Na+-K+-ATPase活性：37.16±0.72μmolPi/mg.pro.h和37.05±1.22μmolPi/mg.pro.h(P＜0.01)。 結(jié)論：(1)不同類型大鼠血管平滑肌CaN活性變化不同。SHR

13、的阻力血管(MA)平滑肌的CaN活性下降，但12周與16周間無顯著差異，而SDsaCA的CaN活性卻明顯低于SHR。證明阻力血管CaN活性的下降可能是自發(fā)性高血壓的發(fā)病原因，而不是鹽性高血壓的直接原因。(2)SHR左室流出道自發(fā)電活動頻率明顯高于正常大鼠，而SDsa明顯低于正常大鼠，說明心肌肥厚不是左室流出道自發(fā)電活動增加的主要原因。(3)SHR左心室流出道自發(fā)性的快電位和慢電位均表現(xiàn)為APD、APD50和APD90的延長，RPF減慢。