肝再生磷酸酶3對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和遷移能力的影響.pdf

1、背景:目前研究顯示，肝再生磷酸酶3(PRL3)對多種腫瘤細(xì)胞的存活、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用，但是具體機(jī)制不詳，尤其是該分子在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮的作用及其機(jī)制未見闡明。此文是關(guān)于PRL3與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞相關(guān)的一些研究。
　　目的:篩選PRL3在細(xì)胞中相結(jié)合的蛋白，為進(jìn)一步研究PRL3在信號通路中的作用分子機(jī)制提供支持。研究PRL3基因過表達(dá)和沉默對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和遷移能力的影響。
　　方法:pGEX-6P-1

2、-PRL3原核表達(dá)載體，誘導(dǎo)GST-PRL3融合蛋白表達(dá)并純化該蛋白，利用pull-down技術(shù)篩選小鼠神經(jīng)細(xì)胞中與PRL3相互作用的分子，質(zhì)譜鑒定與PRL3相互作用蛋白。構(gòu)建重組pcDNA3.1-PRL3真核表達(dá)載體，建立PRL3基因過表達(dá)體系，用pcDNA3.1作對照;同時(shí)設(shè)計(jì)并合成siRNA，構(gòu)建siRNA-pSilencer3.1重組質(zhì)粒，建立PRL3基因沉默體系，用pSileneer3.1作對照，四組質(zhì)粒分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染腦膠質(zhì)瘤U

3、251細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)、劃痕分析等實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞的增殖和遷移能力。
　　結(jié)果:(1)pull-down結(jié)果顯示，在小鼠腦組織裂解液中有四個(gè)未知蛋白條帶，質(zhì)譜鑒定出新的與PRL3相互作用的分子。(2)與對照組相比，PRL3基因過表達(dá)的腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞數(shù)量增多，遷移加快;而PRL3基因沉默后腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞數(shù)量減少，但遷移無明顯變化。
　　結(jié)論:在小鼠腦組織中篩選出了4種與PRL3相互作用的分子，其中一種經(jīng)鑒定為Tubulin-b