生物鐘基因CLOCK促進神經(jīng)膠質(zhì)瘤的細胞增殖和遷移.pdf

1、北京協(xié)和醫(yī)學院博士研究生論文博士學位論文學校代碼：1 0 0 2 3學 號：B 2 0 1 0 0 0 5 0 3 2生物鐘基因C L O C K 促進神經(jīng)膠質(zhì)瘤的細胞增殖和遷移所 院 ： 基礎學院姓 名 ： 李愛花指導教師： 彭小忠教授導師小組： 強伯勤教授袁建剛教授彭小忠教授學科專業(yè)： 生物化學與分子生物學研究方向： 神經(jīng)發(fā)育與疾病的分子機理完成日期： 2 0 1 3 年6 月北京協(xié)和醫(yī)學院博士研究生論文6 ．4 酶切產(chǎn)物回收???

2、?????????????????????2 56 ．5 連接????????????????????????????．2 56 ．6 轉(zhuǎn)化??????????????????????????????2 56 ．7 接菌????????????????????????????．2 66 ．8 質(zhì)粒抽提???????????????????????????2 66 ．9 酶切鑒定??????????????????????????．2 6

3、6 ．1 0 測序及結(jié)果分析???????????????????????2 67 ．細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染???????????????????????????2 77 ．1 細胞培養(yǎng)及傳代???????????????????????．．2 77 ．2 轉(zhuǎn)染??????????????????????????????2 78 ．M T T ??????????????????????????????????????????．2 88 ．1

4、原理????????????????????????????．2 88 ．2M T T 溶液的配制???????????????????????．2 88 ．3 操作步驟??????????????????????????．2 89 ．克隆形成實驗???????????????????????????一2 81 0 ．T R A N S W E L L 細胞遷移實驗?????????????????????2 910 ．1 實驗原理??

5、????????????????????????2 910 ．2 實驗步驟??????????????????????????2 911 ．細胞劃痕實驗???????????????????????????3 0l1 ．1 實驗原理：?????????????????????????3 011 ．2 實驗步驟：?????????????????????????3 01 2 ．熒光素酶報告基因?qū)嶒?????????????????????

6、??3 01 2 ．1 原理????????????????????????????3 01 2 ．2 細胞樣品的準備??????????????????????．．3 01 2 ．3 熒光素酶基因活性檢測???????????????????一3 113 ．數(shù)據(jù)處理和分析??????????????????????????3 1結(jié) 果??????????????????????????????????????????．3 21 ．膠質(zhì)

7、瘤組織和膠質(zhì)瘤細胞系中C L O C K 蛋白表達檢測??????????3 22 ．C L O C K 對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的生長的影響????????????????3 43 ．C L O C K 對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的遷移的影響????????????????3 74 ．m i R ．1 2 4 在膠質(zhì)瘤細胞中對C L O C K 的靶向作用檢測??????????3 85 ．M i R ．12 4 和C L O C K 膠質(zhì)瘤細胞中N