不動桿菌BD189對赭曲霉毒素A的脫毒研究.pdf

1、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)是由曲霉屬和青霉屬產(chǎn)毒菌株產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物,主要存在于谷物及其副產(chǎn)品中。OTA具有多種毒性,對動物和人體健康有很大的潛在危害。本課題通過對OTA脫毒菌株的篩選,獲得具有OTA脫毒能力的菌株,并研究了該菌株的OTA脫毒能力及其脫毒特性等。本課題分為三個(gè)部分。第一部分是OTA脫毒菌株的篩選及鑒定。我們從土壤中篩選得到一株細(xì)菌菌株,具有較強(qiáng)的OTA脫毒能力。經(jīng)過菌株純化和16S rDNA測序及

2、分析,確定該菌株屬于不動桿菌屬,本實(shí)驗(yàn)室將其命名為Acinetobacter sp. BD189。第二部分,我們對BD189菌株的脫毒能力和機(jī)理進(jìn)行了研究,并對經(jīng)BD189菌株脫毒處理后反應(yīng)體系的毒性變化進(jìn)行了生物學(xué)驗(yàn)證。BD189菌株的活菌有很強(qiáng)的脫毒能力,能在24h內(nèi)去除80%以上的OTA,而滅活菌無脫毒能力。同時(shí),活菌對OTA進(jìn)行脫毒處理后,其反應(yīng)體系在HPLC的色譜圖中出現(xiàn)了與赭曲霉毒素α(Ochratoxinα,OTα)特征相

3、同的產(chǎn)物峰。這表明BD189菌株的脫毒機(jī)理為生物降解而不是物理吸附。微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與未經(jīng)脫毒處理的OTA毒素溶液相比,經(jīng)BD189菌株脫毒處理后的OTA毒素溶液的細(xì)胞毒性降低,實(shí)驗(yàn)體系中HepG2細(xì)胞形成的微核數(shù)明顯減少,這說明了BD189菌株對OTA脫毒后,沒有產(chǎn)生毒性更強(qiáng)的新毒性物質(zhì),達(dá)到了脫毒目的。第三部分,我們對BD189菌株的脫毒特性及其降解酶的性質(zhì)進(jìn)行了研究。BD189菌株降解OTA的時(shí)間曲線符合酶促反應(yīng)的特征,隨著體系

4、中OTA濃度的下降,降解速率逐漸減小。BD189在30℃和40℃時(shí)有最大降解率,在10℃、20℃和50℃時(shí)降解率明顯下降。在pH6.5和pH7.5中性條件下的降解率最高,而酸性或堿性條件均可影響該菌的脫毒能力。此外,菌體濃度越大,脫毒能力越強(qiáng)。我們以粗酶液為對象進(jìn)行降解酶性質(zhì)的初步研究。結(jié)果表明BD189菌株的降解酶是胞內(nèi)酶,其最適反應(yīng)溫度為30℃,最適反應(yīng)pH為8.0。金屬離子螯合劑EDTA能抑制降解酶的活性,而羧肽酶抑制劑不能抑制它