新型磷脂微乳電動(dòng)色譜法的建立及其在預(yù)測(cè)藥物皮膚滲透性中的應(yīng)用.pdf

1、微乳電動(dòng)色譜(MEEKC)是使用微乳液作為分離介質(zhì)的一種電泳技術(shù)，具有適用范圍廣、分離速度快、試樣消耗少的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，已廣泛用于分離科學(xué)領(lǐng)域，同時(shí)由于微乳液滴具有類(lèi)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的有序親水和疏水區(qū)，藥物在微乳液滴中的分配可在一定程度上模擬其在生物膜上的被動(dòng)擴(kuò)散過(guò)程，因此微乳與色譜技術(shù)結(jié)合，還可以用于藥物與細(xì)胞膜的相互作用研究。但目前應(yīng)用于毛細(xì)管電動(dòng)色譜系統(tǒng)的微乳體系主要是以十二烷基硫酸鈉為表面活性劑構(gòu)成的，其組成與細(xì)胞膜成分相差懸殊。本課題擬

2、使用磷脂類(lèi)生物表面活性劑制備新型微乳體系，通過(guò)不同化合物集合的定量保留-結(jié)構(gòu)關(guān)系研究，闡明該類(lèi)微乳電動(dòng)色譜的溶質(zhì)保留機(jī)制，篩選可用于皮膚滲透性評(píng)價(jià)的微乳體系，建立定量保留-皮膚滲透性關(guān)系，探討MEEKC作為高通量藥物膜通透性篩選工具的應(yīng)用價(jià)值。具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　第一部分 MEEKC中微乳體系的制備及溶質(zhì)保留因子重現(xiàn)性的考察
　　目的:以大豆磷脂為主要表面活性劑，制備出適用于微乳電動(dòng)色譜法使用的穩(wěn)定的微乳體系，并通過(guò)測(cè)定

3、系列化合物的溶質(zhì)保留因子在不同批次微乳體系下的批間重復(fù)性和同批次微乳體系下的日間重復(fù)性，考察溶質(zhì)保留因子測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性。
　　方法:1主要以大豆磷脂、十二烷基硫酸鈉、膽酸鈉為表面活性劑，正丁醇為助表面活性劑，磷酸鹽緩沖液為水相，選擇不同的油相，通過(guò)制作偽三相圖的方法，確定微乳各組成的比例。通過(guò)粒度和Zeta電位參數(shù)的測(cè)定對(duì)微乳的微觀(guān)結(jié)構(gòu)性質(zhì)進(jìn)行表征,并考察不同pH條件和室溫放置不同時(shí)間后微乳粒徑和Zeta電位的變化。2用相同組成

4、相同制備方法制備了三批微乳液，以化合物硫脲、鄰甲苯胺、2-萘酚以及電滲流標(biāo)記物二甲基亞砜(DMSO)和微乳標(biāo)記物十二烷基苯的混合溶液作為測(cè)試溶液，測(cè)定溶質(zhì)保留時(shí)間和保留因子的批間重復(fù)性。使用同一批次微乳液連續(xù)測(cè)定三天，考察日間重復(fù)性。
　　結(jié)果:1制備了7種微乳體系，其粒徑范圍在4.14-15.9 nm，Zeta電位范圍在-12--40.5 mv之間。在其他組成不變的情況下，油相種類(lèi)的改變對(duì)微乳的粒徑和Zeta電位沒(méi)有明顯影響。微

5、乳液在室溫下放置一個(gè)月以及在pH值3-10范圍內(nèi)，外觀(guān)及粒徑無(wú)明顯變化。2以組成為1.56％SP-1.5％ SDS-7.5％丁醇-0.85％庚烷-0.16％乙腈-88.43％磷酸鹽緩沖液(20 mM磷酸二氫鈉緩沖液，微乳pH9.2)的微乳液作為背景流動(dòng)相，測(cè)得各溶質(zhì)保留時(shí)間的批間重復(fù)性RSD在0.36％-0.81％范圍內(nèi)，日間重復(fù)性RSD在3.5％-5.8％，保留因子的批間重復(fù)性RSD在1.0％-1.6％范圍內(nèi)，日間重復(fù)性RSD在0.7

6、％-3.0％。
　　結(jié)論:1成功制備出7種穩(wěn)定的磷脂微乳體系，為MEEKC的應(yīng)用研究打下了基礎(chǔ)。2溶質(zhì)保留時(shí)間在不同批次微乳的電動(dòng)色譜中重現(xiàn)性良好，而在同一批次微乳電動(dòng)色譜中日間重現(xiàn)性不太理想，但由于每個(gè)樣品都隨行DMSO和十二烷基苯進(jìn)樣，各被測(cè)物容量因子的批間及日間重復(fù)性均良好。
　　第二部分微乳電動(dòng)色譜溶質(zhì)保留機(jī)制分析及預(yù)測(cè)藥物皮膚滲透性的微乳體系選擇
　　目的:將第一部分制備出的7種微乳體系用于電動(dòng)色譜后的溶質(zhì)保

7、留行為進(jìn)行線(xiàn)性溶劑化參數(shù)模型分析，揭示化合物與微乳擬生物膜相互作用的分子機(jī)制，并通過(guò)與皮膚滲透過(guò)程的線(xiàn)性溶劑化特征參數(shù)比較，選擇出適合預(yù)測(cè)藥物皮膚滲透性系數(shù)(logKp)的微乳體系。
　　方法:收集足夠量且具有不同結(jié)構(gòu)特征的化合物集合，進(jìn)行MEEKC保留因子的測(cè)定。將測(cè)得的容量因子與化合物的分子描述符做多元線(xiàn)性回歸方程，得到線(xiàn)性溶劑化方程，從方程系數(shù)解析各種分子間作用力在溶質(zhì)分配過(guò)程中的貢獻(xiàn)。然后再將各系統(tǒng)方程的系數(shù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理

8、，比較不同系統(tǒng)中溶質(zhì)保留行為的相近性。
　　結(jié)果:收集了26個(gè)具有Abraham描述符的小分子芳香族化合物，在所制備的7種微乳體系下測(cè)得保留因子，得到7個(gè)微乳電動(dòng)色譜體系的線(xiàn)性溶劑化方程。溶劑化參數(shù)模型分析結(jié)果表明溶質(zhì)的體積和氫鍵堿性在MEEKC保留中影響最大。磷脂微乳相比于SDS微乳體系的變化是磷脂微乳體系的氫鍵堿度(a)增加，體系內(nèi)聚能(v)及其與溶質(zhì)間的n或π電子作用(e)減弱。皮膚滲透過(guò)程與微乳系統(tǒng)ME1、ME5、ME7的

9、線(xiàn)性溶劑化方程系數(shù)間的矢量距離都比較短，但由于ME7系統(tǒng)的樣品出峰情況和基線(xiàn)穩(wěn)定性都比較好，故選擇ME7體系模擬藥物的皮膚滲透過(guò)程。
　　結(jié)論:磷脂微乳電動(dòng)色譜體系下的溶質(zhì)保留特征與其他色譜體系有一定的類(lèi)似性，即溶質(zhì)的體積和氫鍵堿性對(duì)保留影響最大，但影響程度與其他體系不同;磷脂微乳與SDS微乳體系在線(xiàn)性溶劑化能量關(guān)系方面有所不同，主要表現(xiàn)在a值升高，v和e值下降。通過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道的皮膚滲透性系數(shù)的線(xiàn)性溶劑化方程特征，尋找到可能模擬藥物

10、皮膚滲透過(guò)程的微乳電動(dòng)色譜體系為2％ SP-3.5％膽酸鈉-6％正丁醇-0.7％辛醇-87.8％磷酸鹽緩沖溶液(20 mM磷酸二氫鈉緩沖溶液)。
　　第三部分磷脂微乳電動(dòng)色譜用于藥物皮膚滲透性系數(shù)和正辛醇-水分配系數(shù)的預(yù)測(cè)
　　目的:以皮膚滲透系數(shù)(logKp)和正辛醇-水分配系數(shù)(logP)為目標(biāo)函數(shù)，建立MEEKC保留因子（1ogk)與logKp值及l(fā)ogP值的相關(guān)性方程，探討MEEKC法在藥物logKp和logP值預(yù)測(cè)

11、方面的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法:收集已知logKp和logP值的藥物，應(yīng)用微乳ME7體系，在pH7.4條件下測(cè)定了34種藥物的logk值，分別與logKp和logP做相關(guān)研究，分析適用于MEEKC預(yù)測(cè)logKp和logP值的藥物集合，建立相關(guān)預(yù)測(cè)模型，并進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:34種藥物的logk值與logP值之間有較好的線(xiàn)性相關(guān)(y=1.9124x+1.2263，R2=0.7635，n=34)，但與logKp值之間無(wú)明顯相關(guān)。將

12、藥物分為酸、中、堿性集合后分析，發(fā)現(xiàn)酸性、中性和堿性藥物的logP值與logk值之間均能建立很好的相關(guān)性，以中性化合物結(jié)果最好(y=1.6595x+1.0705，R2=0.9393，n=7)，而只有堿性藥物的logKp值與logk值之間能建立相對(duì)較好的相關(guān)性(y=2.1377x-6.7621，R2=0.7692，n=16)。引入其他理化參數(shù)后可進(jìn)一步提高預(yù)測(cè)模型的準(zhǔn)確度:logKp=-6.329-0.184MW/100+2.376 lo