慢性咬合干擾疼痛模型中孤啡肽調(diào)控作用初探.pdf

1、目的：建立大鼠單側(cè)咬合紊亂的慢性咬合干擾模型，運用側(cè)腦室注射法（intracerebroventricular，i.c.v）將孤啡肽（Nociceptin/OrphaninFQ，N/OFQ）試劑注入咬合干擾模型，使用Von Frey測痛儀測量大鼠咀嚼肌的疼痛值變化，初步探討孤啡肽在慢性咬合干擾模型中的疼痛調(diào)控作用。
　　方法：本實驗220g-250g SD大鼠35只，均來源于廣西醫(yī)科大學實驗動物中心，取30只用于實驗組建模，其余對

2、照組5只大鼠不做任何處理。實驗組在水合氯醛溶液(3ml/100g)腹腔注射全麻后于右上第一、第二磨牙之間卡入正畸用橡皮筋[1]，形成慢性咬合干擾狀態(tài)。模型組（M組）和空白對照組（K組）均在同等環(huán)境下飼養(yǎng)，每天均使用Von Frey機械測量儀監(jiān)測模型組咀嚼肌的痛覺變化，并于建模后5d、10d、21d分別隨機選取模型組10只用于實驗，運用側(cè)腦室注射法5只注射孤啡肽（G組）、5只注射生理鹽水（N組），注射完畢后0、10、20、30、60、90

3、min分別測量咀嚼肌的痛敏變化，評價孤啡肽試劑使用側(cè)腦室注射法給藥時，對大鼠咀嚼肌的痛閾值變化。實驗期間每天檢查大鼠口內(nèi)的橡皮圈，以確保橡皮圈不掉。
　　結(jié)果：本研究動物樣本來源一致，飼養(yǎng)方法相同。實驗開始前，模型組（M組）與空白對照組（K組）之見樣本情況一致，動物情緒狀態(tài)未發(fā)現(xiàn)明顯的差異。建模后第4-9天，模型組表現(xiàn)出情緒煩躁，對外界刺激的反應度明顯高于空白對照組，且隨時間推移程度加劇;空白對照組未見有明顯的異常狀況。建模后第1

4、0-14天，模型組情緒狀態(tài)煩躁程度比第4-9天的狀態(tài)有所緩解，于空白對照組相比仍表現(xiàn)為活躍，對外界刺激敏感高，但程度逐漸降低。建模第15-21天，模型組表現(xiàn)趨于平靜，與空白對照組無明顯差異。模型組大鼠局麻下側(cè)腦室注射孤啡肽后3個不同時段，3組實驗痛閾值均降低，而注射生理鹽水后痛閾值并無明顯的變化。采用SLY-HFM手持式測痛儀（武漢集思儀器有限公司），量程300g，精確至0.1g，對模型組及空白對照組測量進行痛閾值的測量，實驗中讀取大鼠

5、出現(xiàn)躲避，呼叫，對抗等反應的最小值作為反應大鼠痛閾的數(shù)值。測量中儀器顯示力值越大，表示大鼠的痛閾值越高，痛覺敏感度越低。
　　側(cè)腦室注射孤啡肽能加劇咬合干擾模型咀嚼肌的痛敏，表現(xiàn)為咀嚼肌痛閾值降低。建模后第5d、10d、21d，側(cè)腦室注射孤啡肽(G5、G10、G21)后隨著測量時間的推移，痛閾值逐漸減低，痛覺敏感度逐漸升高。側(cè)腦室給藥后，動態(tài)監(jiān)測咀嚼肌的痛閾之變化，3組不同時間點均顯示90min的痛閾值已降至給藥前（基礎值）的1/

6、3，結(jié)果有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。從整體測量所得結(jié)果來看，建模后第5d、10d實驗組痛閾值處于變化較大的時期，基礎值與給藥后0、10、20、30、60、90min測量結(jié)果比較分析得出:所測時間點上結(jié)果與相鄰前后兩個時間點結(jié)果均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，與其余時間點上測量結(jié)果均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。建模后從第18天開始，痛閾值逐漸趨于穩(wěn)定，與空白對照組相當。于第21天給藥后，基礎值與給藥后0、10、20、30、60、90m

7、in測量結(jié)果比較分析得出:所測時間點上結(jié)果與相鄰（前/后）1個時間結(jié)果無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)外，與其余時間點上測量結(jié)果均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。3個不同對照組，同樣的方式注入鹽水(N5、N10、N21)后，結(jié)果與基礎值相比均略有下降，但測痛儀力學反映下降結(jié)果波動范圍小于20g，且測量時間點內(nèi)兩兩比較結(jié)果及分別于基礎值比較結(jié)果均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。G5與N5、G10與N10、G21與N21同一測量時間上兩兩比較結(jié)果均

8、顯示基礎值、0、10、20min結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而30、60、90min結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:本實驗通過建立動物咬合干擾疼痛模型，觀察側(cè)腦室給藥后咀嚼肌的痛閾值變化，經(jīng)所得數(shù)據(jù)分析結(jié)果，初步得出以下結(jié)論:
　　1咬合干擾易引發(fā)咀嚼肌疼痛，痛閾值隨著咬合干擾存在時間的延長而降低，痛覺敏感度升高。痛閾值降到最低后，咀嚼肌痛閾值開始恢復，并逐漸恢復到建模前水平。