阿托伐他汀對局灶性腦缺血大鼠腦組織血管新生的影響.pdf

1、背景與目的：
　　缺血性腦血管病具有高發(fā)病率、高致殘率的特點，嚴重威脅人們的身體健康，給家庭和社會帶來沉重負擔，探索其發(fā)病機制成為國內(nèi)外研究熱點。腦細胞缺血壞死后，神經(jīng)功能的恢復(fù)很大程度上取決于血管新生情況。3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶 A還原酶抑制劑（他?。┚哂忻黠@的心腦血管保護效應(yīng)，可以通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑減輕心肌缺血再灌注損傷，通過促進血管新生和神經(jīng)再生改善缺血后神經(jīng)功能。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是內(nèi)皮細胞最具特異性的

2、生長因子，在體內(nèi)外均可誘導(dǎo)血管新生。CD105（Endoglin）作為新生血管內(nèi)皮細胞特異性標志物，常用于測定微血管密度（MVD）。
　　內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑是繼線粒體途徑和死亡受體途徑之后的一種新的細胞凋亡途徑，與多種疾病密切相關(guān)。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78/Bip）是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中最主要的分子伴侶蛋白,被認為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標志物。半胱天冬酶12（Caspase-12）是一種凋亡蛋白，是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡的特異性標志物。最新報道稱減少內(nèi)

3、皮細胞凋亡可促進血管新生，增加內(nèi)皮細胞凋亡可以抑制血管新生。那么，局灶性腦缺血后，腦組織血管新生情況如何，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑相關(guān)分子會發(fā)生什么樣的變化，阿托伐他汀的血管新生作用是不是可通過調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑起作用，目前尚不清楚。
　　本實驗將觀察局灶性腦缺血大鼠腦組織血管新生情況，以及組織內(nèi)GRP78/Bip、VEGFmRNA、Caspase-12表達情況，探討阿托伐他汀對局灶性腦缺血大鼠腦組織血管新生的影響及相關(guān)機制，為臨床治療提供

4、理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　健康雄性SD大鼠108只，體重280±20g，隨機分為假手術(shù)組，模型組，治療組，每組再按時間點分為三個亞組：1天組、3天組、7天組，每個亞組12只。采用大腦中動脈栓塞（MCAO）法制備永久性局灶性腦缺血模型，術(shù)后3h，治療組給予阿托伐他汀鈣片4mg/kg.d灌胃，其余兩組在相應(yīng)時間點給予等量生理鹽水灌胃。
　　每只大鼠分別在術(shù)后3h和處死前以Longa評分法做神經(jīng)功能缺損評分，HE染色

5、觀察組織病理學改變，免疫組化檢測CD105、GRP78/Bip蛋白，RT-PCR檢測VEGF mRNA，Western-blot檢測Caspase-12蛋白。
　　結(jié)果：
　　1. Longa神經(jīng)功能評分：假手術(shù)組大鼠未見神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，評分均為0；模型組和治療組大鼠均可見不同程度神經(jīng)功能缺損癥狀，且兩組各時間點處死前評分差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而術(shù)后3h評分差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2.

6、HE染色：假手術(shù)組神經(jīng)細胞及膠質(zhì)細胞輪廓清晰，排列整齊，胞漿豐富，淡染，細胞核大且圓，核仁清晰，細胞周圍間隙致密無水腫，無炎癥細胞浸潤；模型組梗死灶中心神經(jīng)細胞輪廓模糊，排列紊亂，數(shù)量減少，缺血梗死灶周圍有膠質(zhì)細胞增生，間質(zhì)腫脹稀疏，炎性細胞浸潤；治療組神經(jīng)細胞與模型組相比組織結(jié)構(gòu)尚清晰，間質(zhì)水腫明顯減輕，胞核與胞質(zhì)尚能分清。
　　3.免疫組化檢測CD105蛋白表達：假手術(shù)組可見少量CD105陽性細胞，模型組、治療組CD105陽性

7、細胞表達增多，而且可見少量新生血管，呈條索樣，且各時間點模型組較假手術(shù)組高，治療組較模型組、假手術(shù)組均高，且差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；隨時間延長，假手術(shù)組各時間點CD105表達無明顯差異，模型組和治療組CD105表達逐漸升高。
　　4.免疫組化檢測GRP78/BiP蛋白表達：假手術(shù)組GRP78/BiP弱陽性表達，模型組、治療組 GRP78/BiP表達增多，且各時間點模型組較假手術(shù)組高，治療組較模型組低、較假手術(shù)組高，且差

8、異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；隨時間延長，假手術(shù)組GRP78/BiP表達各時間點無明顯差異，模型組和治療組GRP78/BiP表達逐漸降低。
　　5. RT-PCR檢測VEGFmRNA表達：假手術(shù)組少量表達VEGFmRNA，模型組、治療組 VEGFmRNA表達增多，且各時間點模型組較假手術(shù)組高，治療組較模型組、假手術(shù)組均高，且差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；隨時間延長，假手術(shù)組 VEGFmRNA表達各時間點無明顯差異，模型組

9、和治療組 VEGFmRNA表達逐漸升高。
　　6. Western-blot檢測 Caspase-12蛋白表達：假手術(shù)組少量表達Caspase-12蛋白，模型組、治療組 Caspase-12蛋白表達增多，且各時間點模型組較假手術(shù)組高，治療組較模型組低、較假手術(shù)組高，且差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；隨時間延長，假手術(shù)組 Caspase-12表達各時間點無明顯差異，模型組和治療組Caspase-12表達逐漸降低。
　　7.

10、 VEGFmRNA表達和 Caspase-12蛋白表達相關(guān)分析：假手術(shù)組各時間點VEGFmRNA與Caspase-12蛋白之間不存在線性相關(guān)（P>0.05），模型組、治療組各時間點VEGFmRNA與Caspase-12蛋白之間存在線性相關(guān)（P<0.05），且為負相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.局灶性腦缺血大鼠腦組織缺血半暗帶區(qū)血管新生明顯，且阿托伐他汀可通過上調(diào)VEGFmRNA，促進血管新生。
　　2.局灶性腦缺血大鼠腦組