載脂蛋白E擬態(tài)COG1410對大鼠腦創(chuàng)傷后早期海馬組織Aβ代謝調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、創(chuàng)傷性腦損傷（Traumatic brain injury, TBI）會導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病，同時會表現(xiàn)與阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)相似的認知功能損害。有確鑿的證據(jù)表明，TBI是AD發(fā)病的重要危險因素，同時β淀粉樣蛋白（β-Amyloid，Aβ）產(chǎn)生和降解失平衡在形成AD的過程中扮演著重要角色。在分析觀察TBI后早期死亡的病人與遠期幸存的病人，都會發(fā)現(xiàn)Aβ這種物質(zhì)廣泛沉積，TBI發(fā)生后會誘導(dǎo)上調(diào)此物質(zhì)。<

2、br>　　通過研究TBI大鼠Aβ含量的表達，我們發(fā)現(xiàn)Aβ在顱腦創(chuàng)傷后12-24小時能達到高峰。即使這種Aβ在創(chuàng)傷中會產(chǎn)生非常強的損傷級聯(lián)反應(yīng)，但是多臨床前研究發(fā)現(xiàn)Aβ量減少后，認知功能都會得到很好的恢復(fù)，因此，增強Aβ清除的方法和策略可能會使TBI的治療受益匪淺。
　　COG1410，是一種源于apoE(Apolipoprotein E，ApoE)受體結(jié)合區(qū)域的小段肽，其自身具有非常強大的抗炎能力，并且能夠提高TBI后病人的感覺功

3、能和軀體運動功能，改善認知功能障礙。為了能夠進一步探索COG1410對于TBI后認知功能障礙的的恢復(fù)情況，本研究評估，TBI后給予COG1410觀察其與Aβ代謝與表達的關(guān)系，結(jié)果顯示當(dāng)TBI后給予COG1410，Aβ清除程度得到了極大的增強，同時TBI自身產(chǎn)生及繼發(fā)生成的Aβ所誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥因子IL-1β與TNF-α的表達也能被COG1410很好的抑制。通過這項研究我們可以推測TBI所誘導(dǎo)的Aβ聚集能夠被COG1410很好的清除。

4、>　　目的:本實驗通過應(yīng)用COG1410減少TBI所誘導(dǎo)的Aβ聚集，同時COG1410能抑制大鼠海馬區(qū)TBI所誘導(dǎo)的的炎癥因子IL-1β與TNF-α的表達。最終為TBI早期認知功能的提升，提供一個新的臨床治療策略和方法。
　　方法:本研究采用SD大鼠160只并自由分成4組:sham組①Sham組(n=40)，②TBI組(n=40)③COG1410(n=40)④COG1410+甘氨酸抑制劑組(n=40)。并且每組都被分成4個時間點，

5、分別為TBI后6小時，12小時，24小時，48小時。我們所建立的TBI模型采用的Marmarou法。我們觀察TBI后海馬區(qū)形態(tài)學(xué)變化通過HE染色。通過共聚焦顯微鏡熒光的方法觀察Aβ的定位情況。通過Western-blot法檢測Aβ，IL-β和TNF-α蛋白的表達。Morris水迷宮在TBI后7-11天來檢測認知和記憶能力。實驗采用Gel-Doc軟件分析系統(tǒng)來分析實驗結(jié)果。采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差方法來分析實驗數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析所使用軟件是SPSS1

6、8.0。兩兩比采用q檢驗，組與組之間的比較使用單因素方差分析，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1通過鏡下觀察HE染色:海馬區(qū)細胞，Sham組，排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，沒有明顯的病理改變。TBI組，海馬區(qū)腦組織不同程度的疏松水腫。細胞及周圍微血管間隙在創(chuàng)傷后明顯增寬。海馬區(qū)神經(jīng)元無論從架構(gòu)上還是數(shù)量上都遭受嚴重的破壞，核固縮并且核仁丟失。COG1410組，海馬區(qū)組織水腫明顯減輕，細胞及周圍微血管間隙變小。神經(jīng)

7、元結(jié)構(gòu)保持完整，數(shù)量也有明顯的增多。而Th組觀察情況與TBI組類似。
　　2檢測認知學(xué)習(xí)和記憶功能:TBI組與Sham組相比較，其在所有的時間點穿越平臺次數(shù)及平均逃避潛伏期都明顯的升高(P＜0.05)。COG1410組與TBI相比時，COG1410組有明顯的運動和認知學(xué)習(xí)能力的提升，平均逃避潛伏期在8-10天時候相比TBI組有明顯的縮短(P＜0.05）。而Th組與COG1410組比較的時候發(fā)現(xiàn)，其逃避潛伏期仍然比COG1410組延

8、長很多，并且具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　3 TNF-α使用Western blot檢測結(jié)果:Sham組表達TNF-α不明顯，并且在所有時間點上面沒有明顯改變，而相對比Sham組，TBI組從傷后6小時TNF-α就開始表達(P＜0.05)，在12小時達到了一個峰值（P＜0.05），并且這種高表達一直持續(xù)到48小時還沒有衰減(P＜0.05)。當(dāng)COG1410組與TBI組比較時候，TNF-α表達量明顯低于TBI組，并且這種

9、降低在各個時間點都有很好的表現(xiàn)(P＜0.05)
　　4 IL-1β使用Western blot檢測結(jié)果:IL-1β在sham組各個時間點都表達量非常低，并且各個時間點沒有明顯的變化。但是與TBI組比較時明顯發(fā)現(xiàn)TBI組IL-1β從6小時開始就有個明顯的提升（P＜0.05），并且在12小時達到了一個高峰（P＜0.05）。當(dāng)COG1410組與TBI組比較時候發(fā)現(xiàn)，IL-1β的表達明顯低于TBI組（P＜0.05），并且這種低聚集實驗全部

10、時間點未有改變。
　　5免疫熒光發(fā)雙標(biāo)海馬區(qū)Aβ與NeuN共聚定位情況，神經(jīng)元應(yīng)用FITC標(biāo)記神經(jīng)元標(biāo)志物NeuN的綠色熒光，Aβ應(yīng)用TRITC標(biāo)記的紅色熒光，其在TBI后12小時共聚達到高峰。
　　6 Aβ使用Western blot檢測結(jié)果，在Sham組，我們不能發(fā)現(xiàn)有Aβ出現(xiàn)在各個時間。相比較于Sham組Aβ的變化，TBI組Aβ從傷后6小時開始出現(xiàn)，并且這種出現(xiàn)聚集持續(xù)升高直到12小時到達一個最高峰(P＜0.05)。并

11、且這種Aβ的聚集自己本身未曾有削減的趨勢。并且在傷后24小時與Sham組相比其依然保持較高的含量(P＜0.05）。當(dāng)觀察COG1410組的改變時候發(fā)現(xiàn)相比于TBI組，Aβ的表達從6-24h都是低含量的狀態(tài)（P＜0.05）而反觀Th組，即使有COG1410存在，但是疊加上甘氨酸這種抑制劑后，Aβ的表達不再下降，并且在所有時間點都比COG1410組高含量存在（P＜0.05）。
　　結(jié)論:我們根據(jù)TBI后會誘發(fā)Aβ表達增多，來給予COG