MicroRNA生物合成酶單核苷酸多態(tài)性與結(jié)直腸癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系.pdf

1、目的:結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，近年來在包括中國在內(nèi)的亞洲國家，其發(fā)病率與死亡率均已呈逐年上升趨勢。MicroRNA(miRNA)是一類廣泛存在于真核生物中，長度約為22個核苷酸的小型非編碼RNA，miRNA在許多生理病理過程中，如:胚胎發(fā)育，細(xì)胞的分化、增殖、凋亡以及腫瘤發(fā)展和激素分泌等過程都扮演著不可忽視的作用。單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphisms，SNP)是指在基因組水平上由單個核苷

2、酸的變異引發(fā)的DNA的多態(tài)性變化。MiRNA相關(guān)單核苷酸多態(tài)性(miRNA-related single nucleotide polymorphisms，miR-SNPs)，是指導(dǎo)致miRNA基因調(diào)控功能紊亂的一類功能型SNP的總稱，其可調(diào)節(jié)miRNA及靶基因的表達，從而影響腫瘤發(fā)生風(fēng)險、治療效果及預(yù)后。MiR-SNPs包括:miRNA核酸序列SNP，miRNA生物合成酶SNP和miRNA結(jié)合位點SNP。MiRNA生物合成酶SNP與人

3、類腫瘤發(fā)生風(fēng)險關(guān)系密切，但關(guān)于其與結(jié)直腸癌關(guān)系的研究甚少。本研究對生物合成酶XPO5(rs11077)，RAN(rs14035), Dicer(rs3742330), TNRC6B(rs9623117), GEMIN3(rs197412),GEMIN4(rs2740348)的SNP進行測序分析，結(jié)合病例-對照研究，尋找與結(jié)直腸癌發(fā)生風(fēng)險相關(guān)的特異SNP位點，篩查易患結(jié)直腸癌的高危人群。
　　方法:
　　1研究對象:結(jié)直腸癌組

4、患者為2006年1月～2008年12月間，在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外科住院的手術(shù)患者，經(jīng)內(nèi)鏡檢查、組織病理確診為結(jié)直腸癌，并行結(jié)直腸癌根治手術(shù)。結(jié)直腸癌組137例抗凝靜脈血標(biāo)本，均取自結(jié)直腸癌患者術(shù)前靜脈血樣;對照組134例抗凝靜脈血標(biāo)本，均來自2013年10月～2014年10月間，在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院體檢的正常人，詳細(xì)記錄體檢資料，并除外與結(jié)直腸癌相關(guān)的疾病，取靜脈血樣。
　　2基因組DNA提取:用DNA純化試劑盒(Promeg

5、a，Madison，WI，USA)提取靜脈血標(biāo)本的基因組DNA，提取后置于4℃恒溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>　　3基因組DNA擴增及miR-SNP篩查:在NCBI數(shù)據(jù)庫中查找與6個miRNA生物合成酶相關(guān)SNP位點對應(yīng)的目的基因，設(shè)計PCR擴增引物，用PCR預(yù)混試劑盒進行擴增，PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳證實后，送往上海捷瑞生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司用聚合酶鏈反應(yīng)-連接酶檢測反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction-ligas

6、e detection reaction, PCR-LDR)方法對XPO5(rs11077), RAN(rs14035), Dicer(rs3742330), TNRC6B(rs9623117),GEMIN3(rs197412)，GEMIN4(rs2740348)的SNP位點進行檢測。
　　4統(tǒng)計分析:采用t檢驗(student t-test)比較計量資料，采用x2檢驗(Pearson Chi-Square test)對結(jié)直腸癌組

7、和對照組的計數(shù)資料如性別、吸煙情況、飲酒情況、肥胖情況進行比較。采用x2檢驗對結(jié)直腸癌組和對照組的生物合成酶XPO5(rs11077)，RAN(rs14035)，Dicer(rs3742330)，TNRC6B(rs9623117), GEMIN3(rs197412), GEMIN4(rs2740348)的SNP位點基因型頻率進行分析。
　　所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0(SPSS Inc.，Chicago，IL，USA)統(tǒng)計軟件進

8、行統(tǒng)計分析，P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1對結(jié)直腸癌組與對照組的年齡、性別進行比較，結(jié)果顯示兩組年齡(t=1.206，P=0.229)、性別(2=2.478，P=0.115)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，說明結(jié)直腸癌組與對照組均衡可比。
　　2對結(jié)直腸癌組與對照組吸煙情況、飲酒情況、肥胖情況進行比較，結(jié)果顯示兩組吸煙情況(x2=0.588，P=0.293)、飲酒情況(x2=0.694，P=0.

9、155)、肥胖情況(x2=1.503，P=0.220)，兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3對miRNA生物合成酶6個位點的SNP分布頻率分析顯示，在結(jié)直腸癌組與對照組之間，rs11077、rs14035、rs9623117、rs2740348多態(tài)性位點進行各組間比較，發(fā)現(xiàn)這四個位點SNP分布頻率無明顯差異。而對于Dicer基因的多態(tài)位點rs3742330，AA、AG+GG基因型在結(jié)直腸癌組中出現(xiàn)的頻率是55.5％和4

10、5.5％，而在對照組中出現(xiàn)的頻率為37.3％和62.7％，對于rs3742330位點AA基因型攜帶者相對AG+GG基因型攜帶者發(fā)病風(fēng)險為2.09倍(odds ratio，2.09;95％ CI，1.29-3.40; P=0.003);對于GEMIN3基因的多態(tài)位點rs197412，TT、CT+CC基因型在結(jié)直腸癌組出現(xiàn)頻率為54.7％和45.3％，在對照組出現(xiàn)頻率為40.3％和59.7％，TT基因型攜帶者相對CT+CC基因型攜帶者具有更