探討代謝型谷氨酸受體4對樹突狀細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷水平的影響.pdf

1、樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)是專業(yè)抗原呈遞細(xì)胞(antigen presentingcell，APC)，并在調(diào)節(jié)固有免疫和特異性免疫系統(tǒng)中起著關(guān)鍵的作用。細(xì)胞成熟的過程伴隨著識別病原體、上調(diào)MHC分子和共刺激分子、激活抗原特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞。在早期的混合淋巴反應(yīng)實驗中，樹突狀細(xì)胞有效地誘導(dǎo)初始T細(xì)胞增殖的能力大約是其他APC（如巨嗜細(xì)胞）的100倍。
　　環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine

2、 monophosphate，cAMP)是一種環(huán)狀核苷酸，在細(xì)胞內(nèi)充當(dāng)?shù)诙攀共⒖梢哉{(diào)節(jié)細(xì)胞的各種活動。免疫細(xì)胞中的cAMP的升高通常有著抑制炎癥反應(yīng)的作用。而樹突狀細(xì)胞中的cAMP可以抑制樹突狀細(xì)胞的提呈抗原功能，并阻斷自身免疫和炎癥反應(yīng)?，F(xiàn)有研究已證明小鼠的樹突狀細(xì)胞中有多種谷氨酸受體(glutamate receptors，GluRs)表達(dá)，谷氨酸信號通路與其cAMP的水平及細(xì)胞因子的分泌有關(guān)。因此，研究人樹突狀細(xì)胞中谷氨酸信號通

3、路與cAMP的關(guān)系有重要的免疫學(xué)意義.
　　目的:
　　建立人樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)體系并探討代謝型谷氨酸受體4(metabotropicglutamate receptor4，mGluR4)在樹突狀細(xì)胞及免疫系統(tǒng)中所起的作用及其相關(guān)機制。
　　方法:
　　1.使用密度梯度離心法從外周富集血中分離提取單個核細(xì)胞(PBMC)，加入GM-CSF及IL-4誘導(dǎo)其分化為未成熟樹突狀細(xì)胞，使用“細(xì)胞因子雞尾酒”(PGE2、IL

4、-6、L-1β、TNF-α)刺激其成熟。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測樹突狀細(xì)胞表面標(biāo)記物HLA-DR、CD80、CD86、CD83、CD1a及CD14的表達(dá)。
　　3.使用反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription-PCR，RT-PCR)及熒光實時定量PCR(Quantitative Real-time PCR)法檢測樹突狀細(xì)胞中mGluR4的表達(dá)。
　　4.用酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinked im

5、munosorbent assay, ELISA）法檢測樹突狀細(xì)胞加入mGluR4激動劑L-(+)-2-Amino-4-phosphonobutyric acid(L-AP4)前后細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate，cAMP)的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.倒置相差顯微鏡觀察提取的單核細(xì)胞成功分化成樹突狀細(xì)胞。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示培養(yǎng)出的樹突狀細(xì)胞高表達(dá)HLA-DR、C

6、D80、CD86、CD83、CD1a，符合成熟樹突狀細(xì)胞的特性。
　　3.PCR結(jié)果顯示成熟的樹突狀細(xì)胞存在代謝型谷氨酸受體4的表達(dá)。
　　4.樹突狀細(xì)胞接受L-AP4的刺激后，在L-AP4為5μM濃度時，樹突狀細(xì)胞內(nèi)cAMP表達(dá)水平降低，但P＞0.05，沒有統(tǒng)計學(xué)意義。當(dāng)L-AP4達(dá)到10μM時，cAMP表達(dá)水平降低，且P＜0.01，存在統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1.人樹突狀細(xì)胞中表達(dá)代謝型谷氨酸受體4。<