LisH1蛋白在血管新生中的作用及其分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、在脊椎動(dòng)物胚胎發(fā)育過(guò)程中，心血管系統(tǒng)是首先開(kāi)始發(fā)育并發(fā)揮功能的系統(tǒng)，這為其他系統(tǒng)的發(fā)育提供了必需的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。血管新生是形成完整血管系統(tǒng)的重要過(guò)程，主要包括基底膜的降解，內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和增殖，管腔形成和血管成熟與穩(wěn)定等步驟。血管新生對(duì)胚胎發(fā)育以及許多生理和病理過(guò)程均有重要作用，同時(shí)也受到多種促血管生成和抑制血管生成因子的精密調(diào)控。促血管生成和抑制血管生成因子之間的生理平衡保證了血管新生正常進(jìn)行。一旦這個(gè)平衡被打破，將會(huì)引起血管發(fā)育的異常并

2、引發(fā)一系列疾病。
　　我們實(shí)驗(yàn)室一直以來(lái)都致力于研究NudC/Lis1/Dynein信號(hào)通路。通過(guò)對(duì)Lis1（無(wú)腦回綜合征致病基因lissencephaly1的蛋白產(chǎn)物）保守結(jié)構(gòu)域的分析，我們實(shí)驗(yàn)室找到了一個(gè)含有Lis1氨基端保守結(jié)構(gòu)域LisH(Lis Homology)的蛋白LisH1（又稱FOR20，F(xiàn)GFR1 Oncogene Partner-related protein of20kD）。LisH1在全身多種器官中廣泛表達(dá)

3、，且高表達(dá)于肺、脾和腎等器官。為了進(jìn)一步研究LisH1的生理功能，我們構(gòu)建了LisH1基因敲除小鼠。LisH1+/-雜合子小鼠能夠正常發(fā)育且可孕育，與野生型小鼠沒(méi)有明顯差異。而通過(guò)LisH1+/-雜合小鼠之間交配，我們一直無(wú)法獲得LisH1-/-純合小鼠，且出生小鼠中野生型和雜合小鼠的比例約為1∶2。因此，我們推測(cè)完全敲除LisH1后會(huì)導(dǎo)致小鼠胚胎致死。通過(guò)收集和鑒定不同發(fā)育時(shí)期的小鼠胚胎，我們確定LisH1-/-胚胎在第11.5天左右

4、發(fā)生胚胎致死。通過(guò)對(duì)第8.5、9.5和10.5天的胚胎的研究我們發(fā)現(xiàn)完全敲除LisH1后，卵黃囊和胚胎能夠形成初始的毛細(xì)血管網(wǎng)，提示LisH1可能不影響內(nèi)皮細(xì)胞的分化和血管生成。然而完全敲除LisH1后，卵黃囊和胚胎的毛細(xì)血管網(wǎng)不能夠正常發(fā)生血管重塑以形成成熟的有層次的血管網(wǎng)絡(luò)。此外，我們通過(guò)Q-PCR的方法發(fā)現(xiàn)敲除LisH1后，會(huì)導(dǎo)致許多血管新生相關(guān)的重要蛋白(如Gja4、Gja5、uPA和PAI1等)mRNA水平發(fā)生改變。這些數(shù)據(jù)提