順鉑誘導(dǎo)HBV再激活和肝細(xì)胞損傷的分子機(jī)制研究.pdf

1、乙型病毒性肝炎是一種嚴(yán)重威脅人類健康的重要公共衛(wèi)生問題，據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全世界約20億人曾感染過HBV，其中近4億成為HBsAg陽性的慢性攜帶者，而其中的3/4是來源于中國；全球每年因HBV感染所致死的近100萬，其中約半數(shù)在中國。同時(shí)據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，癌癥是目前人類最主要的死亡原因之一；而這些腫瘤患者合并有HBV感染的數(shù)目也極其龐大，當(dāng)這些患者在接受化療或免疫抑制劑治療時(shí)，其中部分患者會(huì)發(fā)生HBV再激活的現(xiàn)象，大量瞬時(shí)活化的HB

2、V則可能導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)嚴(yán)重的肝功能損傷甚至是肝衰竭，從而引起治療減緩或是中斷，繼而耽誤腫瘤患者的有效治療，必將嚴(yán)重影響其預(yù)后甚至是危及其生命。
　　近年來，國內(nèi)外已有多項(xiàng)臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)順鉑等化療藥物可以誘導(dǎo)HBV再激活，從而引起HBV復(fù)制增強(qiáng)，同時(shí)伴隨急性肝功能損傷或肝衰竭的危象，導(dǎo)致病死率急劇上升。但是順鉑誘導(dǎo)HBV再激活的分子機(jī)制至今仍不清楚。本研究中，我們首先在體外成功構(gòu)建了基于環(huán)化自連的HBV DNA(circularized

3、 HBV DNA)感染的細(xì)胞和動(dòng)物模型，并通過與線性HBV DNA感染模型比較，發(fā)現(xiàn)circularized HBV DNA的感染效率和復(fù)制水平明顯優(yōu)于線性的HBV DNA(P<0.05)，由于circularized HBV DNA在結(jié)構(gòu)上完全等同于HBV cccDNA，因而在沒有外源載體DNA的干擾下，可以更加真實(shí)地反應(yīng)HBV感染的基本病理生理過程；進(jìn)而為下一步的實(shí)驗(yàn)研究及HBV慢性持續(xù)感染的機(jī)制和抗病毒的治療提供強(qiáng)有力的依據(jù)。其次

4、，我們分別在體內(nèi)和體外證實(shí)：順鉑一方面可以通過直接上調(diào)HBV復(fù)制相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子PGC-1α和HNF-4α的表達(dá)，從而增強(qiáng)HBV核心啟動(dòng)子活性，繼而在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)HBV的復(fù)制；另一方面可以直接上調(diào)HBV cccDNA的表達(dá)，從而導(dǎo)致HBV DNA水平顯著增加。最后，我們通過RT-PCR、Western-blot、BrdU、siRNA和流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)證實(shí)，DDP誘導(dǎo)HBV再激活致肝細(xì)胞損傷的分子機(jī)制主要通過以下兩個(gè)途徑來完成：其一，順鉑可以

5、直接誘導(dǎo)肝細(xì)胞氧化應(yīng)激（ROS水平上調(diào)），并抑制其細(xì)胞的增殖從而阻滯于S期；高氧化狀態(tài)下的內(nèi)環(huán)境導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，從而引發(fā)未折疊蛋白反應(yīng)，當(dāng)UPR超載時(shí)，誘發(fā)細(xì)胞凋亡，參與急性肝細(xì)胞損傷甚至肝功能衰竭的病理生理過程；其二，順鉑顯著上調(diào)細(xì)胞Alix蛋白表達(dá)，并增加HBV核心顆粒的直接釋放，顯著增加的HBcAg有可能作為一種強(qiáng)免疫原，從而激發(fā)機(jī)體發(fā)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，繼而導(dǎo)致急性肝細(xì)胞損傷及肝衰竭；同時(shí)姜黃素和NAC可以成功規(guī)避在臨床上由順鉑所