1,25-(OH)2-vitamin D3聯(lián)合α-干擾素在抗肝纖維化中對(duì)肝星狀細(xì)胞的影響和作用.pdf

1、目的：
　　觀察1，25-(OH)2-vitamin D3聯(lián)合α-干擾素(interferonα，IFN-α)對(duì)肝星狀細(xì)胞纖維化相關(guān)指標(biāo)表達(dá)情況的影響。評(píng)價(jià)兩者藥物聯(lián)合作用在肝臟纖維化時(shí)對(duì)HSCs影響效果，并探討可能的抗肝纖維化的調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)鼠星狀細(xì)胞HSCs，分別用1，25-(OH)2-vitamin D3和IFN-α進(jìn)行刺激和兩者共同刺激，用MTT法觀察各實(shí)驗(yàn)組HSCs增殖情況;采用Real

2、-time PCR檢測(cè)各組HSCs表達(dá)CoI1α1、MMP-9和TIMP-1的mRNA的水平;應(yīng)用Western Blot檢測(cè)TGF-β受體和Smad3蛋白的表達(dá)情況以及ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞因子TGF-β、IL-6、IL-10和TNF-α的表達(dá)水平。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用CCL4誘導(dǎo)肝纖維化小鼠，經(jīng)過(guò)1，25-(OH)2-vitamin D3和IFN-α單獨(dú)和聯(lián)合治療后，通過(guò)病理HE染色和Masson染色觀察炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及膠原纖維沉積情況。

3、r>　　結(jié)果：
　　MTT法檢測(cè)HSCs增殖情況顯示不論是否存在PDGF干預(yù)，1，25-(OH)2-vitamin D3和IFN-α單獨(dú)刺激和聯(lián)合應(yīng)用與正常組相比，細(xì)胞增殖均受到抑制(P＜0.05)，且細(xì)胞周期蛋白D1表達(dá)單獨(dú)刺激下均明顯降低。Real-time PCR檢測(cè)CoI1α1和TIMP-1經(jīng)過(guò)兩者單獨(dú)和聯(lián)合刺激后mRNA均明顯下降而MMP-9則明顯上升(P＜0.05)。Western Blot法檢測(cè)TGF-β受體和Sma

4、d3蛋白聯(lián)合治療組比單獨(dú)治療組表達(dá)水平有所減少。促纖維化因子TGF-β與其受體結(jié)果相反，治療后表達(dá)水平下降，但是聯(lián)合與單獨(dú)治療無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。促進(jìn)炎癥現(xiàn)象發(fā)生的細(xì)胞因子IL-6和TNF-α經(jīng)過(guò)單獨(dú)和聯(lián)合治療后比正常組相比明顯降低而炎癥抑制性因子IL-10則明顯上升(P＜0.05)，IL-6聯(lián)合治療后表達(dá)水平比單獨(dú)治療顯著增加，但與正常組相比表達(dá)仍然明顯下降(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在