曲美他嗪對(duì)抗大鼠急性低壓性缺氧損傷的機(jī)制研究.pdf

1、目的：急性高原病（AMS）是高原地區(qū)的特發(fā)病與常見(jiàn)病，是由于高原低氧環(huán)境所誘發(fā)的多組織器官的病理學(xué)改變及功能紊亂。研究表明，藥物防治手段可有效減少AMS的發(fā)病率和致死率。因此，本課題通過(guò)建立大鼠急性低壓性缺氧模型，模擬人體急進(jìn)高原性低氧損傷，觀察曲美他嗪（Trimetazidin，TMZ）對(duì)急性高原缺氧誘發(fā)的心肌組織及腦組織損傷的保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制，以期為新型抗高原缺氧藥物的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1、實(shí)

2、驗(yàn)動(dòng)物分組：采用隨機(jī)數(shù)字表法，將72只雌性的SD大鼠隨機(jī)分作6個(gè)實(shí)驗(yàn)組（每組12只），分別設(shè)立正常對(duì)照組（C）、急性低氧模型組（M）及高、中、低劑量TMZ給藥組（缺氧前灌胃給藥，TMZ濃度分別給予20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg)、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（陽(yáng)性藥設(shè)為尼莫地平，缺氧前灌胃給藥20mg/kg）。
　　2、急性低氧模型的建立：通過(guò)調(diào)控?cái)?shù)字化低壓氧艙，模擬海拔7000米高原的大氣氧分壓，將各組大鼠置于低壓氧艙內(nèi)進(jìn)行缺氧

3、（正常對(duì)照組除外），持續(xù)低氧處理12h，建立大鼠急進(jìn)高原性低氧損傷模型。
　　3、組織形態(tài)學(xué)觀察：低壓缺氧結(jié)束后，制備各組大鼠心肌組織及腦組織的石蠟包埋切片，通過(guò)蘇木素-伊紅（H.E）染色法，觀察各實(shí)驗(yàn)組大鼠多組織、器官的形態(tài)學(xué)改變。
　　4、含水量的測(cè)定：低壓缺氧結(jié)束后，快速取出各組大鼠腦組織，采用干濕重質(zhì)量差法，測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組大鼠腦含水量的變化，觀察TMZ對(duì)急性低壓缺氧大鼠腦水腫的影響。
　　5、血生化指標(biāo)的檢測(cè)：低

4、壓缺氧結(jié)束后，快速抽取各組大鼠全血，低溫離心后分離血漿，利用放射免疫法測(cè)定大鼠血漿中心鈉素（ANP）和內(nèi)皮素-1（ET-1）的含量，并通過(guò)化學(xué)比色法測(cè)定大鼠血漿中乳酸脫氫酶（LDH）的活性，觀察TMZ對(duì)大鼠急性低壓缺氧損傷的保護(hù)作用。
　　6、 RT-PCR技術(shù)檢測(cè)：低壓缺氧結(jié)束后，快速取出各組大鼠心肌組織與腦組織，置于液氮中保存，利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組大鼠心肌組織與腦組織中水通道蛋白-1（AQP-1）、水通道蛋白-4（

5、AQP-4）在mRNA水平的表達(dá)情況。
　　7、 Western blot方法檢測(cè)：低壓缺氧結(jié)束后，快速取出各組大鼠心肌組織與腦組織，置于液氮中保存，利用Western Blot方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組大鼠心肌組織與腦組織中水通道蛋白-1（AQP-1）、水通道蛋白-4（AQP-4）在蛋白水平的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、 H.E染色結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，急性低氧模型組大鼠的心肌組織及腦組織均發(fā)生明顯的缺氧損傷；與模型組中

6、低氧損傷的大鼠相比，各劑量TMZ及陽(yáng)性藥物尼莫地平均可顯著減輕急性低壓缺氧誘導(dǎo)的大鼠心肌組織及腦組織損傷的形態(tài)學(xué)改變。
　　2、腦含水量檢測(cè)結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，急性低氧模型組大鼠的腦部含水量明顯增加（P<0.01）；與模型組中低氧損傷的大鼠相比，各劑量TMZ及陽(yáng)性藥物尼莫地平均可顯著降低急性低壓缺氧誘導(dǎo)的大鼠腦含水量的增加（尼莫地平組P<0.05，高劑量TMZ組P<0.01，中、低劑量TMZ組P<0.05）。
　　3、血

7、生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，急性低氧模型組大鼠血漿中ANP及ET-1含量顯著增加（P<0.01），LDH活性顯著升高（P<0.01）；與模型組中低氧損傷的大鼠相比，各劑量TMZ及陽(yáng)性藥物尼莫地平均可顯著減少急性低壓缺氧后大鼠血漿中ANP及ET-1的含量（尼莫地平組、各劑量TMZ組P<0.01），降低大鼠血漿中LDH活性（尼莫地平組、高劑量TMZ組P<0.01，中、低劑量TMZ組P<0.05）。
　　4、 RT-PCR檢測(cè)結(jié)

8、果：與正常對(duì)照組相比，急性低氧模型組大鼠的心肌及腦組織中AQP-1、AQP-4在mRNA水平的表達(dá)均顯著升高（P<0.01）；與模型組中低氧損傷的大鼠相比，各劑量TMZ及陽(yáng)性藥物尼莫地平均可顯著降低急性低壓缺氧后大鼠心肌及腦組織中AQP-1、AQP-4在mRNA水平的表達(dá)（其中心肌AQP-1/4 mRNA：尼莫地平組、各劑量TMZ組， P<0.01；腦組織AQP-1 mRNA：尼莫地平組、高、中劑量TMZ組，P<0.01；腦組織AQP-

9、4 mRNA：尼莫地平組、各劑量TMZ組，P<0.01）。
　　5、 Western blot檢測(cè)結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，急性低氧模型組大鼠的心肌及腦組織中 AQP-1、AQP-4在蛋白水平的表達(dá)均顯著升高（P<0.01）；與模型組中低氧損傷的大鼠相比，各劑量 TMZ及陽(yáng)性藥物尼莫地平均可顯著降低急性低壓缺氧后大鼠心肌及腦組織中 AQP-1、AQP-4在蛋白水平的表達(dá)（尼莫地平組、各劑量TMZ組，P<0.01）。
　　結(jié)論：