Cfp1參與T細(xì)胞發(fā)育調(diào)控以及機(jī)制研究.pdf

1、Cfp1作為一個(gè)關(guān)鍵的表觀遺傳調(diào)控分子，參與了基因轉(zhuǎn)錄的精密調(diào)控。一方面，Cfp1能與未甲基化的CpG結(jié)合，與基因的轉(zhuǎn)錄激活有關(guān)，另一方面，Cfp1還能與Setd1復(fù)合物—H3K4甲基化轉(zhuǎn)移酶結(jié)合。Cfp1在DNA甲基化與H3K4三重甲基化修飾這兩種與基因激活有關(guān)的表觀遺傳修飾間架起了橋梁。即Cfip1能識(shí)別未甲基化的CpG再通過招募甲基化轉(zhuǎn)移酶Setd1從而在相應(yīng)基因座位上形成H3K4me3修飾參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，Cfp1特

2、異性影響轉(zhuǎn)錄活性高的基因，在缺失Cfp1后轉(zhuǎn)錄活性高的基因其TSS上H3K4me3下降明顯。Cfp1全基因組敲除在著床前導(dǎo)致胚胎死亡，這證實(shí)Cfp1的重要性，但是也阻礙了在后期與成年發(fā)育時(shí)期對(duì)Cfp1功能的研究。
　　T細(xì)胞發(fā)育從早期胸腺前體細(xì)胞(Early Thymic Precursors，ETP)開始，然后經(jīng)歷四個(gè)CD4-CD8-雙陰性時(shí)期(Double Negative Stage，DN1-DN4)到達(dá)CD4+ CD8+雙

3、陽性時(shí)期(Double Positive Stage，DP)，再經(jīng)過陽性和陰性選擇發(fā)育為CD4+和CD8+單陽性細(xì)胞(Single Positive stage，SP)，最后遷出胸腺進(jìn)入外周發(fā)揮免疫功能。在DN3時(shí)期發(fā)生一件重要的事件:β選擇，那些成功重排TCRβ的DN3細(xì)胞表達(dá)pre-TCR。 Pre-TCR誘導(dǎo)的增殖對(duì)T細(xì)胞分化到DN4與DP胸腺細(xì)胞發(fā)揮著重要的作用。95％的DP胸腺細(xì)胞由于不能重排TCRα鏈而凋亡，被稱為忽略死亡，

4、還一部分細(xì)胞表達(dá)了與自身抗原有高親和力的TCR而被陰性選擇掉，只有小部分能被陽性選擇分化到CD4+或CD8+單陽性細(xì)胞。
　　為了研究Cfp1在胸腺細(xì)胞發(fā)育中的作用，我們構(gòu)建了Cfp1條件性敲除小鼠，用hCD2-cre或Lcre-cre小鼠在T細(xì)胞特異性敲除Cfp1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，缺失Cfp1后胸腺細(xì)胞的發(fā)育非常明顯地受阻，主要表觀在從DN3到DN4的分化與DP細(xì)胞的大量凋亡。用TCR轉(zhuǎn)基因小鼠能挽救DN3到DN4的分化，而用Bcl2

5、轉(zhuǎn)基因小鼠與RORγt過表達(dá)能恢復(fù)DP胸腺細(xì)胞的存活。這些數(shù)據(jù)提示，Cfp1在DN3時(shí)期參與β選擇，而在DP時(shí)期通過維持RORt的表達(dá)從而調(diào)控DP胸腺細(xì)胞的存活。此外我們發(fā)現(xiàn)TCF-1與Cfp1能共同定位于RORγt啟動(dòng)子上，并且Cfp1的敲除并不影響TCF-1在RORγt啟動(dòng)子上的結(jié)合。這提示在DP胸腺細(xì)胞中TCF-1啟動(dòng)RORγt的轉(zhuǎn)錄，然后Cfp1/Setd1復(fù)合物被招募到RORγt TSS附近通過H3K4me3修飾維持RORγt