培土清心顆粒對(duì)特應(yīng)性皮炎樣小鼠模型的免疫干預(yù)研究.pdf

1、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是個(gè)人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名盞塾照萎日期：如I墀4月萬(wàn)日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)

2、定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門(mén)機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)廣州中醫(yī)藥大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽名濕數(shù)論文導(dǎo)師簽名日期：ⅫI6年4月2f日呂芬、J五目，∥留該模型成功與否的重要依據(jù)。第二部分PTQx顆粒對(duì)AD樣小鼠的免疫調(diào)控機(jī)制研究目的：通過(guò)PTQX顆粒干預(yù)AD樣小鼠模型，從模型構(gòu)

3、建影響、血清和皮損細(xì)胞因子變化、脾臟Breg細(xì)胞數(shù)量變化等方面探討其影響AD免疫調(diào)控的可能機(jī)制。方法：1將雌性C57BL／6小鼠隨機(jī)分為4組，即正常組、模型組、PTOX高劑量組(臨床2倍劑量，PTQX顆粒1569／kgd)、PTQX低劑量組(臨床等效劑量，PTQX顆粒0789／kgd)。各組小鼠給藥方式是灌胃，培土清心用藥組用不同濃度水溶液灌胃，正常組和模型組同法給予等體積的蒸餾水，造模第一天開(kāi)始用藥，連續(xù)給藥14天；實(shí)驗(yàn)第1天、第7天

4、、第14天觀察各組小鼠行為觀察記分、搔抓次數(shù)、皮損評(píng)分、耳廓厚度等指標(biāo)；2采用DNFB反復(fù)刺激誘導(dǎo)方法造模，造模前備皮(大小約25cmX15cm)。造模第一天背部外涂05％DNFB溶液25ul致敏，其后第5天、第8天、第1l天、第14天在小鼠右耳背面、背部外涂02％的DNFB溶液20ul誘發(fā)皮炎，左耳外涂基質(zhì)溶液20ul作對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)結(jié)束48小時(shí)內(nèi)予眼球摘除法處死，取背部皮損處全層皮膚做皮膚常規(guī)病理和肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)變化(甲苯胺藍(lán)染色)；3

5、采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)小鼠血清中IgE的含量，液相芯片法測(cè)定血清中IFN—y、IL4、ILIO的含量；4提取小鼠背部皮膚組織中總RNA，并鑒定其濃度和純度，采用定量即時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(QPCR)擴(kuò)增后檢測(cè)其皮膚組織中IFN一丫、IL4、IL一10mRNA表達(dá)水平；5取小鼠脾臟，分離并培養(yǎng)脾臟淋巴細(xì)胞，處理后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟細(xì)胞中調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(Breg)水平數(shù)量及變化。結(jié)果：1造模結(jié)束后，模型組小鼠搔抓次數(shù)、皮損評(píng)分