熊果酸對EOMA細(xì)胞生長影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過建立血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)模型，利用不同濃度的熊果酸對體外培養(yǎng)的小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞（EOMA細(xì)胞）進(jìn)行干預(yù)，動態(tài)觀察小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞的生長、細(xì)胞增殖、凋亡以及血管內(nèi)皮生長因子及其受體（VEGF、VEGFR-2）表達(dá)的影響情況，為尋找血管瘤新的治療藥物提供理論依據(jù)。
　　方法：利用小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞（EOMA細(xì)胞）株進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)，將實驗細(xì)胞分為B1組（陰性對照組）:添加0.1mlPBS溶液;B2組:添加0.1ml10

2、mg/L熊果酸溶液;B3組:添加0.1ml20mg/L熊果酸溶液;B4組（陽性對照組）:添加0.1ml10mg/L普萘洛爾。分別在處理后0h，24h，48h觀察比較各組體外培養(yǎng)的EOMA細(xì)胞生長及凋亡的情況。采用HE染色檢測細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;MTT法檢測細(xì)胞增殖情況;流式細(xì)胞術(shù)（AnnexinⅤ/PI染色法）測定細(xì)胞的凋亡情況;用ELISA試驗方法檢測VEGF及VEGFR-2的濃度。所測得的實驗數(shù)據(jù)均使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS20.0描述與分

3、析，定量資料采用均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差表示，各個時間點上效應(yīng)指標(biāo)的比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法重復(fù)測量資料的組間比較采用重復(fù)測量的方差分析，檢驗效能α=0.05，當(dāng)P＜0.05時認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴HE染色觀察細(xì)胞形態(tài):在干預(yù)0h時，B2、B3、B4組與對照組B1相比較，無明顯差異;在干預(yù)24h及48h后，B2、B3、B4與對照組B1相比較，細(xì)胞生長緩慢，稀疏，聚落生長不明顯，以B3、B4組更甚。⑵各組

4、細(xì)胞增殖抑制情況:在0h的時候，B1、B2、B3、B4組的光密度值分別是:0.424±0.003、0.422±0.005、0.422±0.008、0.422±0.008，B2、B3、B4組的細(xì)胞抑制率為:0.43±0.16％、0.57±0.22％、0.57±0.23％。第24h時各組的光密度值分別是:0.665±0.013、0.621±0.004、0.560±0.024、0.577±0.031, B2、B3、B4組的細(xì)胞抑制率分別為:6

5、.62±0.23％、15.71±0.50％、13.28±0.36％。第48h時各組的光密度值分別是:0.879±0.017、0.811±0.032、0.718±0.019、0.745±0.039。 B2、B3組、B4組的細(xì)胞抑制率分別為:7.78±0.41％、18.31±0.31％、15.21±0.55％。統(tǒng)計分析顯示，在第0h時各組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。第24h及48h時，各組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)且B2、

6、B3、B4組光密度值均較B1組低，B3、B4較B2低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);B3與B4的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。⑶流式細(xì)胞術(shù)（AnnexinⅤ/PI染色法）檢測細(xì)胞凋亡率情況:在干預(yù)0h時，各細(xì)胞組凋亡率分別為:9.606±0.155％、9.828±0.185％、9.778±0.264％、9.746±0.168％。干預(yù)后24h，各組細(xì)胞凋亡率分別為:11.773±0.412％、14.158±0.408％、17.2

7、51±1.324％、17.626±0.466％。干預(yù)后48h各組細(xì)胞凋亡率分別為:11.390±1.584％、14.946±1.470％、19.886±1.319％、19.971±2.519％。統(tǒng)計分析顯示，在第0h時各組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。第24h及48h時，各組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);且B2、B3、B4組細(xì)胞凋亡率均較B1組高，B3、B4較B2高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);B3與B4的差異無統(tǒng)

8、計學(xué)意義(P＞0.05)。⑷ELISA檢測VEGF、 VEGFR-2濃度情況:在干預(yù)0h時，B1、 B2、B3、 B4組的VEGF吸光度值分別是:1.963±0.009、1.957±0.011、1.951±0.007、1.941±0.042, VEGF的濃度分別為168.717±0.914、168.096±1.106、167.511±0.741、166.560±4.141。 VEGFR-2的吸光度值分別是:1.510±0.012、1.5

9、06±0.014、1.494±0.020、1.518±0.013。 VEGFR-2的濃度分別為:2748.299±23.564、2740.891±27.786、2715.728±39.654、2764.186±25.257。在干預(yù)24h時，各組的VEGF吸光度值分別是:1.952±0.005、1.666±0.008、1.285±0.013、1.264±0.168,VEGF的濃度分別為167.659±0.460、139.303±0.788

10、、101.583±1.326、99.519±16.672。VEGFR-2的吸光度值分別是:1.492±0.012、1.183±0.012、0.998±0.017、0.989±0.006。 VEGFR-2的濃度分別為:2712.658±24.758、2093.773±24.508、1724.705±33.030、1705.893±11.665。在干預(yù)48h時，各組的VEGF吸光度值分別是:1.956±0.007、1.385±0.009、1

11、.187±0.013、1.239±0.153、 VEGF的濃度分別為168.031±0.716、111.472±0.918、91.905±1.243、97.006±15.155。VEGFR-2的吸光度值分別是:1.485±0.020、0.879±0.018、0.707±0.016、0.688±0.020。 VEGFR-2的濃度分別為:2697.373±39.639、1486.890±36.745、1142.440±32.981、1104

12、.255±41.955。統(tǒng)計分析顯示，在第0h時各組的VEGF、 VEGFR-2的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。第24h及48h時，各組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);且B2、B3、B4組VEGF、VEGFR-2濃度均較B1組低，B3、B4較B2低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);B3與B4的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。⑸結(jié)果說明藥物干預(yù)對體外培養(yǎng)的EOMA細(xì)胞具有抑制增殖、促進(jìn)其凋亡、降低VEGF、VEGFR-2表