鹽酸戊乙奎醚對脂多糖介導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷及功能性蛋白SP-A、SP-D表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察抗膽堿藥物鹽酸戊乙奎醚（PHC）對脂多糖（LPS）所介導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷及表面活性蛋白SP-A、SP-D表達(dá)的變化，并探討其作用機(jī)制。
　　方法：采用A549細(xì)胞作為研究對象，實(shí)驗(yàn)共分為三組：○1空白對照組（C組）： A549細(xì)胞+DMEM培養(yǎng)液；○2脂多糖組（L組）： A549細(xì)胞+DMEM培養(yǎng)液+10mg/L脂多糖；脂多糖+戊乙奎醚組（L+P組）：○3 A549細(xì)胞+DMEM培養(yǎng)液+10mg/L脂多糖+5mg/L戊

2、乙奎醚。培養(yǎng)一定時(shí)間后分別進(jìn)行以下檢測和觀察（1）噻唑藍(lán)(MTT)法藥物敏感試驗(yàn)分別檢測6h，12h，24h和36h各組A549細(xì)胞的OD值；（2）檢測各組培養(yǎng)液中損傷因子乳酸脫氫酶（LDH）、堿性磷酸酶(ALP)、丙二醛(MDA)的表達(dá)情況；（3）用高倍顯微鏡觀測各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；（4）利用流式細(xì)胞儀檢測各組中A549細(xì)胞的周期及凋亡情況；（5）使用Rt-PCR技術(shù)檢測各組中表面活性蛋白SP-A、SP-D的mRNA表達(dá)情況。（6）分

3、別使用Western-blot和ELISA的方法檢測各組中A549細(xì)胞裂解液中表面活性蛋白SP-A、SP-D的表達(dá)情況；
　　結(jié)果：（1）MTT檢測結(jié)果：與C組比較，L組和L+P組的OD值明顯降低；L+P組與L組比較，L+P組的OD值除6h外均明顯升高。（2）損傷因子檢測結(jié)果：L+P組乳酸脫氫酶及丙二醛的表達(dá)較L組明顯降低。（3）細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：L組A549細(xì)胞與C組比較，體積扁小，外觀偏圓，胞質(zhì)呈空亮，在胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)了大小不等的顆

4、粒；加入PHC干預(yù)后的L+P組A549細(xì)胞表現(xiàn)有所改善。（4）細(xì)胞的周期及凋亡情況：與C組比較，L組細(xì)胞的增殖活性明顯降低，細(xì)胞的凋亡率也明顯增加，S期細(xì)胞比率下降，G0/G1期細(xì)胞的比率升高；與L組比較，L+P組細(xì)胞存活率升高，細(xì)胞凋亡率下降，G0/G1期細(xì)胞比率降低，G2/M期細(xì)胞比率均增加。（5）Rt-PCR結(jié)果：與L組比較，L+P組表面活性蛋白SP-A、SP-D的mRNA表達(dá)顯著增強(qiáng)。(6)Western-blot與ELISA結(jié)