低頻強(qiáng)噪聲對(duì)巴馬香豬內(nèi)耳損傷及機(jī)制研究.pdf

1、目的:建立經(jīng)低頻強(qiáng)聲暴露的巴馬香豬噪聲性耳聾模型。通過(guò)對(duì)巴馬香豬低頻強(qiáng)聲暴露后不同時(shí)刻行聽性腦干反應(yīng)(Auditory Brainstem Response，ABR)檢測(cè)、觀察其行為學(xué)變化、前庭結(jié)構(gòu)及耳蝸毛細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)形態(tài)、內(nèi)耳凋亡因子天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)免疫組織化學(xué)及免疫熒光染色，了解正常組巴馬香豬耳蝸內(nèi)、外毛細(xì)胞形態(tài)變化，低頻強(qiáng)聲對(duì)巴馬香豬聽功能損傷程度、耳蝸毛細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)及前庭器官形態(tài)的影響及內(nèi)

2、耳凋亡因子的表達(dá)。初步觀察低頻強(qiáng)聲對(duì)巴馬香豬位聽器官損傷特點(diǎn)，探討其損傷產(chǎn)生的相關(guān)機(jī)制。
　　方法:將8只巴馬香豬隨機(jī)分為對(duì)照組(2只)及實(shí)驗(yàn)組(6只)，均于實(shí)驗(yàn)前行聽性腦干反應(yīng)檢測(cè)，將實(shí)驗(yàn)組再隨機(jī)分為暴露后即刻組、暴露后36小時(shí)組及暴露后84小時(shí)組，每組2只。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物暴露于50Hz，142dBSPL的低頻噪聲中5分鐘，再分別于暴露后即刻、暴露后36小時(shí)及暴露后84小時(shí)觀察行為學(xué)變化，并行ABR檢測(cè)，然后在掃描電鏡下觀察各組動(dòng)物

3、耳蝸毛細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)及前庭器官的形態(tài)變化;用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)各組動(dòng)物內(nèi)耳相應(yīng)結(jié)構(gòu)上Caspase-3的表達(dá);用免疫熒光4，6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽(DAPI)標(biāo)記細(xì)胞核方法進(jìn)一步觀察證實(shí)毛細(xì)胞胞質(zhì)中Caspase-3的表達(dá)情況，同時(shí)通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)方法計(jì)算毛細(xì)胞缺失率以判定細(xì)胞死亡情況。對(duì)照組巴馬香豬除不暴露于噪聲環(huán)境外，其他與實(shí)驗(yàn)組巴馬香豬處理相同。
　　結(jié)果:8只(16耳)巴馬香豬低頻強(qiáng)聲暴露前ABR閾值為91.25±1

4、0.72 dBSPL;實(shí)驗(yàn)組所有動(dòng)物低頻強(qiáng)聲暴露后雙耳ABR閾值均未能引出。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在強(qiáng)聲暴露過(guò)程中多安靜不動(dòng)，暴露后即刻出現(xiàn)短暫站立、行走不穩(wěn)，未見眼震;暴露后第2天巴馬香豬活動(dòng)基本恢復(fù)正常，但活躍程度仍有所下降;實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物球囊斑及橢圓囊斑掃描電鏡下耳石及感覺細(xì)胞的纖毛未見明顯異常。噪聲暴露后即刻組掃描電鏡下可見內(nèi)、外毛細(xì)胞氣球樣變，外毛細(xì)胞靜纖毛融合及散在性缺失;噪聲暴露后36小時(shí)組可見內(nèi)、外毛細(xì)胞輕度氣球樣變及其靜纖毛散亂;噪聲暴

5、露后84小時(shí)組耳蝸基底回可見內(nèi)、外毛細(xì)胞缺失，中回及頂回內(nèi)、外毛細(xì)胞靜纖毛缺失且以第三排外毛細(xì)胞靜纖毛缺失最重。噪聲暴露后毛細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)損傷以基底回及中回為主，頂回?fù)p傷較輕。巴馬香豬耳蝸各部位均可見Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)，隨著暴露后時(shí)間延長(zhǎng)，Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)逐漸減弱。免疫熒光方法可見噪聲暴露后即刻組、暴露后36小時(shí)組與正常對(duì)照組相比較，三排外毛細(xì)胞排列及層次明顯錯(cuò)亂;同時(shí)免疫熒光染色可見噪聲暴露后84小時(shí)組三層外毛細(xì)胞消失