靶向于前列腺癌的載阿霉素納米泡的構(gòu)建及其體外治療效能評估.pdf

1、目前，前列腺癌發(fā)展成為我國男性高發(fā)的惡性腫瘤。雖然大部分前列腺癌對抗雄激素治療都有效，但是絕大多數(shù)會在雄激素治療過程中發(fā)展為雄激素非依賴性前列腺癌(androgenic independent prostate cancer，AIPC)。而目前針對AIPC的治療方法和手段較少。相關(guān)研究顯示，由于腫瘤新生血管基底膜不完整，內(nèi)皮間隙寬，納米級超聲造影劑微泡的粒徑小，能穿過腫瘤血管，達到腫瘤實質(zhì)，實現(xiàn)腫瘤組織特異性分子顯像。前列腺特異性膜抗原

2、(prostate specific membrane antigen，PSMA)是前列腺癌細胞膜抗原，尤其常表達于前列腺轉(zhuǎn)移性癌和AIPC中，已經(jīng)成為前列腺癌的靶向診斷和治療研究的熱點。廣譜抗腫瘤藥物阿霉素(doxorubicin，DOX)有良好的殺傷腫瘤細胞的作用，但對正常細胞也有強烈的細胞毒性，對機體有明顯的毒副作用。如何在降低阿霉素副作用的情況下達到有效治療腫瘤的作用一直是目前腫瘤靶向治療研究的難點。前期已制備出攜帶PSMA單克

3、隆抗體的納米級超聲造影劑，且在能前列腺癌中靶向特異性顯像。因此，本研究擬結(jié)合前期的研究結(jié)果及相關(guān)研究進展，構(gòu)建一種攜載PSMA單克隆抗體的載阿霉素納米泡，在實現(xiàn)前列腺癌的特異性超聲分子顯像的同時，用超聲波擊破靶向載藥納米泡，釋放出阿霉素，使阿霉素在腫瘤局部組織內(nèi)濃度增高，達到靶向治療前列腺癌的目的，為前列腺癌的診斷治療提供一種新的思路和方法。
　　目的
　　制備靶向于前列腺癌的攜載PSMA單克隆抗體的載阿霉素納米泡，觀察靶向

4、載藥納米泡的基本特性和與前列腺癌AIPC細胞靶向結(jié)合的能力，對其體內(nèi)顯像能力和體外對前列腺癌細胞殺傷的效果及其機制進行研究和評估。
　　材料和方法
　　應用機械震蕩法制備載阿霉素的納米泡，利用生物素-鏈霉素法制備攜載PSMA單克隆抗體的載阿霉素納米泡。用熒光顯微鏡觀察納米泡和阿霉素連接情況，用熒光顯微鏡觀察納米泡和PSMA單克隆抗體偶聯(lián)的情況。用光鏡和透射電鏡觀察靶向載藥納米泡形態(tài)大小。用粒徑檢測儀檢測其粒徑和電位。用酶標儀

5、檢測其載阿霉素濃度。在超聲治療儀不同輻照強度和時間條件下輻照靶向載藥納米泡，探究最佳輻照強度和時間。在超聲波治療儀最適輻照條件下檢測其藥物釋放率。將靶向載藥納米泡與臨床用微米級聲學造影劑對比研究，觀察二者在小鼠肝臟和腎臟上的增強造影效果。最后用光鏡觀察靶向載藥納米泡與前列腺癌細胞的結(jié)合情況，在此基礎(chǔ)上研究靶向載藥納米泡在體外的治療效果，并在掃描電鏡下觀察超聲輻照后靶向載藥納米泡對前列腺癌細胞的作用。
　　結(jié)果
　　攜載PSM

6、A單克隆抗體的靶向載藥納米泡在光鏡下大小適中、分布均勻;載藥納米泡的脂質(zhì)外殼在熒光顯微鏡下顯示為阿霉素發(fā)出的紅色熒光;FITC標記的二抗與靶向載藥納米泡結(jié)合后，靶向納米泡表面顯示為綠色熒光。靶向載藥納米泡平均粒徑為(793.80±92.05)nm，電位為(8.74±2.41)mV。酶標儀測量納米泡載阿霉素的濃度為(1.18±0.11)mg/ml。超聲治療儀的最適輻照強度和時間為1.0 W/cm2和18s。在超聲波治療儀輻照下，阿霉素的釋

7、放率為(48.65±3.99)％。靶向載藥納米泡在小白鼠肝臟和腎臟顯影的達峰時間遲于微米級聲學造影劑、上升時間和持續(xù)顯影時間均長于臨床用微米級聲學造影劑，且有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，而兩者的峰值強度無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。靶向載藥納米泡可特異性地粘附在表達PSMA的前列腺癌C4-2細胞表面，與不表達PSMA的前列腺癌細胞PC-3和胃癌細胞MKN45不粘附結(jié)合。相同超聲輻照條件下，靶向載藥納米泡對C4-2細胞和PC-3細胞的殺滅

8、作用明顯強于單純藥物組、空白納米泡組、靶向納米泡組、空白組，但與載藥納米泡組差別不明顯。應用掃描電鏡進一步觀察到，超聲輻照靶向載藥納米泡組的C4-2細胞表面不平，有孔道生成，而超聲輻照單純C4-2組的細胞表面光滑，無孔道生成。
　　結(jié)論
　　本實驗成功制備了性質(zhì)穩(wěn)定的攜載PSMA單克隆抗體載藥納米泡，且證實納米泡表面成功連接有PSMA單克隆抗體，阿霉素均勻分布在納米泡的脂質(zhì)外殼中。其在體內(nèi)有較好的顯影效果，且在體外實驗中證實