前列腺組織特異的ODC和AdoMetDC雙反義靶向載體構(gòu)建及治療前列腺癌研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文前列腺組織特異的ODC和AdoMetDC雙反義靶向載體構(gòu)建及治療前列腺癌研究姓名：李瑋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉賢錫20081016山東大學(xué)博士學(xué)位論文我們以往研究的結(jié)果而設(shè)計(jì)，在已構(gòu)建的ODC單反義腺病毒和可以同時(shí)表達(dá)ODC和AdoMetDC反義RNA雙反義腺病毒的基礎(chǔ)上，我們又構(gòu)建起以O(shè)DC和AdoMetDC為靶標(biāo)，分別以經(jīng)過(guò)改造的非雄激素依賴和雄激素依賴的PSES啟動(dòng)子為表達(dá)調(diào)控元

2、件的前列腺特異的ODC和AdoMetDC雙反義RNA表達(dá)載體，并驗(yàn)證它們對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖和侵襲的抑制作用，從而為前列腺癌的基因治療研究提供了新的方法和途徑。第一章前列腺非雄激素依賴啟動(dòng)子介導(dǎo)的ODC、AdoMetDC雙反義RNA表達(dá)載體的構(gòu)建研究目的：構(gòu)建前列腺非雄激素依賴啟動(dòng)子介導(dǎo)的同時(shí)表達(dá)ODC和AdoMetDC雙反義RNA腺病毒載體，為非雄激素依賴的前列腺癌靶向治療研究提供新工具和手段。研究方法：1將ODC，AdoMetDC兩種

3、PCR產(chǎn)物與pMDl9Tsimple進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化，經(jīng)篩選、鑒定獲得TAAdoMetDCODC。2將TAAdoMetDCODC經(jīng)酶切后回收目的基因片段，反向插入經(jīng)同樣酶切的穿梭質(zhì)粒phdTrack中，構(gòu)建成質(zhì)粒pAdTrackAdoMetDCODC，并將改造的前列腺非雄激素依賴啟動(dòng)子(PPA8)插入調(diào)控部位，建立前列腺特異的重組穿梭質(zhì)粒pAdTrack—PPA8AdoMetDCODC。3PCR法從pAdTrack—PPA8一ODC—Ad

4、oMetDC擴(kuò)增目的基因PPA8AdoMetDCODC，將目的基因克隆到穿梭載體pShuttle—EGFP—Basic，得到pShuttle——EGFP——Basic——PPA8——AdoMetDC——ODC4PCR法從pShuttle—CMV上擴(kuò)增polyA，將PCR產(chǎn)物與pShuttle—EGFP—Basic—PPA8一AdoMetDC—ODC進(jìn)行連接得至UpShuttle—EGFP—Basic—PPA8一AdoMetDC—ODC—