鰻弧菌亞精胺結(jié)合蛋白基因的鑒定及功能研究.pdf

1、鰻弧菌亞精胺結(jié)合蛋白基因的鑒定及功能研究學位論文完成目指導教師簽答辯委員會成員簽：翔萼竊f：卜：弧脈A目礦、么≥刀≥矧二％y以緲—：；’秀勉弛么摘蛩Illllllllllll[1llllIIlY2178940鰻弧菌亞精胺結(jié)合蛋白基因的鑒定及功能研究摘要牛物體內(nèi)普遍存在的多胺轉(zhuǎn)運系統(tǒng)PotABCD運載體由四個功能蛋白組成：PotA是三磷酸腺苷酶，為轉(zhuǎn)運系統(tǒng)提供能量；PotB和PotC可在雙層膜上形成轉(zhuǎn)運通道；PotD是一種胞質(zhì)結(jié)合蛋白，有

2、一個多胺識別區(qū)域，對亞精胺有較高的親和性，對腐胺親和性較低。鰻弧菌(1_brioanguillal—um)M3中發(fā)現(xiàn)了編碼亞精胺結(jié)合蛋A的三個推定potD基因：potDl、potD2和potD3。為了研究這三個基因在鰻弧菌M3亞精胺轉(zhuǎn)運中起到的作用以及對致病性鰻弧菌M3毒力的影響，木研究利用框內(nèi)缺失技術構(gòu)建了potDl、potD2和potD3單基因缺失突變株和多基因缺失突變株，同時利用細菌的接合轉(zhuǎn)移技術，以低拷貝克隆質(zhì)粒Pmmb207為

3、載體，構(gòu)建了突變株的瓦補株。在排除了鰻弧菌自身合成對胞內(nèi)多胺含量影響的化學定義的最低培養(yǎng)基M9中，potDl或potD3基因的單獨缺失或同時缺失突變株中多胺的含量與野牛型鰻弧菌M3相比明顯降低，并且其牛長速度也明顯下降，說明potDl和potD3基因能夠參與鰻弧菌M3多胺的轉(zhuǎn)運過程，是鰻弧菌中亞精胺結(jié)合蛋白的編碼基因。potDl和potD3基因通過對多胺轉(zhuǎn)運過程的影響間接的影響了鰻弧菌的牛長能力以及對魚的致病能力。potD2基因與pot

4、Dl和potD3基因之間存在拮抗作用，potD2基因的單獨缺失不會影響鰻弧菌胞內(nèi)多胺的含量，雖然它不參與亞精胺轉(zhuǎn)運蛋白的編碼，但是potD2基因能在一定程度上抑制potDl和potD3基因的表達，所以它的單獨缺失或與potDl、potD3的同時缺失能不同程度的改變鰻弧菌的牛長能力和毒力等。實時熒光定量PCR的方法進一步的驗證了上述基因在突變株中的表達情況，并確定鰻弧菌性狀的改變是由基因表達量的變化引起的。關鍵詞：鰻弧菌亞精胺結(jié)合蛋白基因