高壓均質(zhì)降解黑木耳多糖硫酸酯化衍生物抗輻射作用研究.pdf

1、黑木耳多糖是一種天然食用菌多糖，具有多種生物活性，但由于黑木耳是膠質(zhì)真菌，多糖成分難以擴(kuò)散出來(lái)，并且黑木耳多糖分子量大、溶解度低，多糖生物活性難以充分發(fā)揮，導(dǎo)致黑木耳多糖的廣泛應(yīng)用受限。采用高壓均質(zhì)法提取黑木耳多糖，可以在很大程度上破碎黑木耳細(xì)胞壁，有利于多糖的溶出；硫酸化修飾黑木耳多糖可以改變多糖的取代基種類(lèi)、數(shù)目和位置，多糖的理化性質(zhì)以及生物活性隨之發(fā)生改變，為黑木耳多糖的廣泛應(yīng)用提供了可能性。
　　本課題采用高壓均質(zhì)法提取黑

2、木耳多糖，以多糖得率為指標(biāo)，研究了均質(zhì)時(shí)間、均質(zhì)壓力和料液比三個(gè)因素對(duì)多糖得率的影響，通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)，得到黑木耳多糖的最佳提取工藝為均質(zhì)時(shí)間25min，均質(zhì)壓力28MPa，料液比1:86g/mL，在此工藝條件下，黑木耳多糖得率為46.85％。通過(guò)粘均分子量測(cè)定和體外抗氧化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與常壓水提多糖相比，高壓均質(zhì)法可以將大分子多糖降解為小分子，并且能夠增強(qiáng)多糖的抗氧化活性。高壓均質(zhì)法提取的多糖經(jīng)乙醇分級(jí)得到HAAP20%、HAAP40%

3、、HAAP60%、HAAP80%四個(gè)級(jí)分，體外抗氧化試驗(yàn)表明HAAP80%的抗氧化能力最強(qiáng)。
　　采用濃硫酸法對(duì)HAAP80%進(jìn)行硫酸化修飾，以取代度為指標(biāo)，研究了反應(yīng)時(shí)間、濃硫酸體積和硫酸銨用量三個(gè)因素對(duì)硫酸基取代度的影響，通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)，得到HAAP80%的最佳修飾工藝為反應(yīng)時(shí)間0.9h，濃硫酸體積8.0mL，硫酸銨用量130mg，在此工藝條件下，黑木耳多糖硫酸基取代度為0.595。紅外光譜顯示，硫酸化黑木耳多糖SHAAP

4、保留了多糖母體特征吸收峰，并且存在于指紋區(qū)的硫酸基特征吸收峰明顯增強(qiáng)，表明硫酸化修飾成功；紫外光譜顯示，SHAAP不含核酸和蛋白質(zhì)；GPC圖譜表明，SHAAP分子大小均一；剛果紅實(shí)驗(yàn)表明，SHAAP具有穩(wěn)定的三股螺旋構(gòu)象；單糖分析表明，SHAAP由葡萄糖、甘露糖組成，摩爾比為1:1.69；高碘酸氧化結(jié)果表明，SHAAP中存在1→或1→6或1→2或1→2,6糖苷鍵；Smith降解結(jié)果顯示，SHAAP中存在不被高碘酸鈉氧化的1→3糖苷鍵。<

5、br>　　通過(guò)建立小鼠體內(nèi)60Co-γ輻射損傷模型研究硫酸化黑木耳多糖的輻射防護(hù)作用，結(jié)果表明SHAAP主要通過(guò)三個(gè)途徑發(fā)揮輻射防護(hù)作用：SHAAP能夠有效增加器官指數(shù)，增強(qiáng)單核細(xì)胞吞噬能力，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，從而提高小鼠機(jī)體免疫活性，防止輻射誘導(dǎo)的氧化損傷；SHAAP能夠提高小鼠血清中SOD、CAT活性，增加GSH含量，降低有害產(chǎn)物MDA水平，通過(guò)清除小鼠體內(nèi)過(guò)量自由基，保護(hù)抗氧化酶活性，提高抗氧化物質(zhì)合成能力，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的方式對(duì)