新型Ⅰ類組蛋白脫乙酰化酶(HDAC)抑制劑4CS-202抗結(jié)腸癌作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　觀察Ⅰ類組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑4SC-202體內(nèi)外抗結(jié)腸癌細(xì)胞的作用，旨在為結(jié)腸癌的分子靶向治療進(jìn)行新的探索。
　　方法:
　　1)MTT法、臺盼藍(lán)染色法、細(xì)胞集落試驗檢測不同濃度的4SC-202處理不同作用時間后對結(jié)腸癌細(xì)胞存活、細(xì)胞死亡及細(xì)胞增殖的影響;
　　2)Histone DNA ELISA法、Caspase-3/-9試劑盒方法、AnnexinⅤ-PI流式細(xì)胞儀法檢測4SC-20

2、2對結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的作用;4SC-202處理后對其抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)進(jìn)行檢測，運(yùn)用的方法為Western Blotting;
　　3)PI流式細(xì)胞儀法觀察4SC-202處理結(jié)腸癌細(xì)胞后，細(xì)胞周期的變化。
　　4)用藥理學(xué)和shRNA等手段抑制結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)AKT的活性，觀察抑制后4SC-202體外抗結(jié)腸癌細(xì)胞活性的變化。
　　5)MTT法、Histone DNA ELISA法等方法檢測比較奧沙利鉑組、4SC-20

3、2組以及奧沙利鉑聯(lián)合4SC-202組對結(jié)腸癌細(xì)胞的存活和凋亡的影響。
　　6)建立裸鼠荷瘤模型，觀察奧沙利鉑和/或4SC-202在體內(nèi)抗結(jié)腸癌細(xì)胞活性。
　　結(jié)果:
　　1)4SC-202顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞（原代人結(jié)腸癌細(xì)胞和HT-29，HCT-116，HT-15，DLD-1細(xì)胞株）的存活和增殖，其抑制作用呈時間和濃度依賴性。
　　2)4SC-202誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡。4SC-202可以抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的

4、表達(dá)。
　　3)當(dāng)4SC-202濃度不斷的增大時，結(jié)腸癌細(xì)胞的G1和S期所占比例逐漸減少， G2-M期比例增加。
　　4)添加AKT選擇性抑制劑perifosine、MK-2206或shRNA敲減AKT1/2顯著增加4SC-202誘導(dǎo)的體外抗結(jié)腸癌細(xì)胞的活性。而導(dǎo)入持續(xù)活化的AKT1(CA-AKT1)則抑制4SC-202抗結(jié)腸癌細(xì)胞的作用。
　　5)奧沙利鉑誘導(dǎo)的體外抗結(jié)腸癌細(xì)胞的活性在有低濃度4SC-202存在時明顯

5、增強(qiáng)。兩者協(xié)同給藥誘導(dǎo)的抗結(jié)腸癌細(xì)胞的活性要顯著強(qiáng)于單獨(dú)給藥。
　　6)在裸鼠荷瘤模型中，4SC-202（100mg/kg， Q2D）口服給藥顯著抑制HT-29移植瘤的在體生長。而同時腹腔注射奧沙利鉑（5.0 mg/kg，Q3D）則進(jìn)一步增強(qiáng)4SC-202在體抗癌活性。
　　結(jié)論:
　　1)4SC-202濃度及時間依賴性的抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞存活、增殖，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡;
　　2)4SC-202誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞G2-M