基于microRNA研究益腎清利活血方對(duì)阿霉素腎病大鼠的足細(xì)胞保護(hù)作用.pdf

1、新近的研究資料表明，中國(guó)的慢性腎臟病患者約有1.19億，這對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)造成了極大的負(fù)擔(dān)。其中，腎小球疾病仍是中國(guó)慢性腎臟病發(fā)病的主要原因。足細(xì)胞的損傷和修復(fù)是近年來(lái)腎臟病領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。MicroRNA是一組廣泛存在于病毒、動(dòng)植物及人類的內(nèi)源性小分子，長(zhǎng)度約22個(gè)核苷酸，具有保守性、基因集簇現(xiàn)象和特異性表達(dá)等特點(diǎn)，有研究表明，microRNAs能對(duì)基因的表達(dá)進(jìn)行修飾，microRNA的表達(dá)失調(diào)與一些主要的慢性腎臟病密切相關(guān)。祖國(guó)醫(yī)學(xué)博大精

2、深，為我們提供了寶貴的理論基礎(chǔ)和豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，特別是在慢性腎臟病領(lǐng)域，中醫(yī)藥療效確切，有著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)不可比擬的優(yōu)勢(shì)。本文從中藥復(fù)方、中藥單體兩個(gè)方面研究中醫(yī)藥的足細(xì)胞保護(hù)作用，分析其足細(xì)胞保護(hù)的異同點(diǎn)。
　　實(shí)驗(yàn)一:益腎清利活血方對(duì)阿霉素腎病大鼠的足細(xì)胞保護(hù)作用及其對(duì)腎組織microRNA表達(dá)的影響
　　目的:建立阿霉素腎病大鼠模型，研究益腎清利活血方的足細(xì)胞保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。方法:30只健康的雄性Sprague-Da

3、wley大鼠隨機(jī)分為3組（正常組、模型組、中藥組）。造模后成功后的第7，28，42，和56天，收集24h的尿液標(biāo)本。所有的大鼠在造模后第56天宰殺，收集其血液標(biāo)本和腎組織，分別檢測(cè)24h尿蛋白定量;肝腎功能;光鏡下觀察腎組織病理變化;免疫組化、west-blot法檢測(cè)腎組織nephrin蛋白的表達(dá)。用生物芯片技術(shù)對(duì)腎皮質(zhì)的miRNA表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果:益腎清利活血方能改善阿霉素腎病大鼠的尿蛋白，減輕腎臟的病理?yè)p傷，上調(diào)腎組織中nephr

4、in蛋白的表達(dá)，改善腎臟功能;與正常組相比，阿霉素腎病大鼠模型的腎組織中miRNA-494-5p、miRNA-1249、miRNA-3596c表達(dá)是上調(diào)的，miRNA-582-5p的表達(dá)是下調(diào)的，經(jīng)益腎清利活血方治療后，上調(diào)的miRNA-494-5p、miRNA-1249、miRNA-3596c的表達(dá)能得到抑制，而下調(diào)的miRNA-582-5p的表達(dá)能得到增強(qiáng)。結(jié)論:益腎清利活血方可能通過(guò)調(diào)節(jié)miRNA-494-5p、miRNA-124

5、9、miRNA-3596c、miRNA-582-5p的表達(dá)發(fā)揮其足細(xì)胞保護(hù)作用的。
　　實(shí)驗(yàn)二:雷公藤甲素對(duì)阿霉素腎病大鼠的足細(xì)胞保護(hù)作用及其對(duì)腎組織microRNA表達(dá)的影響
　　目的:建立阿霉素腎病大鼠模型，研究雷公藤甲素的足細(xì)胞保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。方法:30只健康的雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為3組（正常組、模型組、雷公藤甲素組）。造模后成功后的第7，28，42，和56天，收集24h的尿液標(biāo)本。所有的

6、大鼠在造模后第56天宰殺，收集其血液標(biāo)本和腎組織用于生化檢測(cè)和分子生物學(xué)檢測(cè)。用生物芯片技術(shù)對(duì)腎皮質(zhì)的miRNA表達(dá)進(jìn)行分析，并用RT-PCR法反向驗(yàn)證差異性表達(dá)的miRNAs。結(jié)果:雷公藤甲素能減少蛋白尿，改善腎功能，減輕腎組織的病理?yè)p害，且沒(méi)有明顯的肝臟副作用;與正常組相比，阿霉素腎病大鼠模型中miR-344-3p、miR-30b-3p表達(dá)是上調(diào)的，而雷公藤甲素能抑制miR-344-3p、miR-30b-3p表達(dá)的上調(diào)。結(jié)論:雷公藤

7、甲素可能通過(guò)調(diào)節(jié)miR-344-3p、 miR-30b-3p的表達(dá)發(fā)揮其足細(xì)胞保護(hù)作用。
　　實(shí)驗(yàn)三:益腎清利活血方與雷公藤甲素對(duì)阿霉素腎病大鼠療效的比較
　　目的:建立阿霉素腎病大鼠模型，研究益腎清利活血方、雷公藤甲素的足細(xì)胞保護(hù)作用，并對(duì)兩者療效進(jìn)行比較。方法:40只健康的雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為4組（正常組、模型組、中藥組、雷公藤甲素組）。造模后成功后的第7，28，42，和56天，收集24h的尿液標(biāo)

8、本。所有的大鼠在造模后第56天宰殺，收集其血液標(biāo)本和腎組織，分別檢測(cè)24h尿蛋白定量;肝腎功能;光鏡、電鏡下觀察腎組織病理變化;免疫組化、west-blot法檢測(cè)腎組織nephrin蛋白的表達(dá);RT-PCR法檢測(cè)腎組織中nephrin核酸的表達(dá)。結(jié)果:益腎清利活血方、雷公藤甲素均能減少蛋白尿，改善腎功能，減輕腎組織的病理?yè)p害，且沒(méi)有明顯的肝臟副作用。與雷公藤甲素相比，中藥益腎清利活血方能提高阿霉素腎病大鼠的血清白蛋白水平。結(jié)論:益腎清利