溫陽利濕通絡法對阿霉素腎病大鼠治療作用的理論與實驗研究.pdf

1、目的：腎病綜合征(Nephrotic syndrome，NS)是臨床上常見多發(fā)的疾病，西醫(yī)治療難度大，而中醫(yī)治療取得了顯著成果，故從新的理論總結開始，開展了本課題研究。本課題分為理論探討和實驗研究兩大部分，以邱幸凡教授提出的“臟虛絡痹”病機理論為基礎，擬定了溫陽利濕通絡方，運用現(xiàn)代醫(yī)學研究方法，深入研究了該方對阿霉素誘導的腎病綜合征大鼠模型的治療作用及其部分機制，目的在于為臨床NS的治療提供新的理論和實驗依據(jù)。
　　 理論探討：

2、
　　 1、基于絡脈絡病理論及“臟虛絡痹”的病機理論，提出“腎脾陽虛，濕瘀阻絡”是NS的基本病機：(1)腎脾陽虛是致病之本：腎脾陽虛是NS的基本病機；(2)濕瘀阻絡為致病之標：濕瘀阻絡是NS發(fā)生的病理關鍵；(3)臟虛絡痹相互影響，互為因果。
　　 2、根據(jù)病機，提出“溫腎補脾，利濕泄?jié)?，化瘀通絡”是NS的基本治療法則：(1)補臟以治其本：以補脾腎之陽為基本；(2)通絡以治其標：“利濕泄?jié)?，化瘀通絡”是治療NS的關鍵；

3、r>　　 3、提出治療NS的方藥為“溫陽利濕通絡方”。該方由熟附片10g、黃芪30g、黨參10g、白術10g、澤瀉10g、車前子15g、水蛭6g和蟬蛻10g組成。
　　 方法：本研究采用尾靜脈一次性注射阿霉素6mg/kg的方法建立阿霉素誘導的腎病綜合征大鼠模型，即按Bertani法造模，進行了溫陽利濕通絡方干預該模型的實驗研究。將40只Wistar雄性大鼠，隨機分為正常組(n=10)、模型組(n=10)、中藥組(n=10)、西

4、藥組(n=10)。造模成功后，正常組和模型組灌生理鹽水(1ml/100g體重)；中藥組灌溫陽利濕通絡方(1ml/100g體重)；西藥組灌鹽酸貝那普利溶液(0.3mg/100g體重)，均每日一次，連續(xù)灌胃四周。給藥期間每天觀察食量、體毛、大便、精神狀態(tài)、體重及水腫情況。尿標本檢測24小時尿蛋白定量(24HUPQ)、β2微球蛋白(β2-MG)、尿白蛋白(ALB)，采用干化學法檢測；血標本檢測血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)

5、、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)和膽固醇(CHOL)，采用全自動生化分析儀測定。ET-1、VEGF及TGF-β1的變化采用免疫組化法研究。TGF-β1mRNA的表達采用RT-PCR方法檢測。
　　 結果：
　　 1.對大鼠一般情況的觀察：正常組大鼠活動靈活，反應較快，皮毛致密、有光澤，沒有出現(xiàn)水腫；模型組大鼠造模后3天出現(xiàn)活動減低，精神差、體毛翻轉凌亂、大便稀，食量減少，3周后出現(xiàn)水腫并逐漸加重，尤以腹水明顯；中藥組

6、與西藥組大鼠經(jīng)治療后，精神較模型組好，食量好，大便呈顆粒狀，活動情況好轉，且水腫較輕。模型組、中藥組、西藥組在造模成功時，體重較正常組顯著下降(P＜0.01)；實驗結束時，中藥組和西藥組大鼠體重顯著高于模型組(P＜0.05)，而中藥組與西藥組之間無顯著性差異；
　　 2.對大鼠蛋白尿的影響：模型組、中藥組、西藥組于造模后第7天開始，24HUPQ均明顯高于正常組(P＜0.01)，說明造模成功。治療后第14、21、28天，中藥組的2

7、4HUPQ明顯低于模型組(P＜0.01)，中藥組與西藥組比較無顯著性差異。實驗結束時，中藥組的尿β2-MG明顯低于模型組(P＜0.01)，尿ALB低于模型組(P＜0.05)。中藥組與西藥組比較無顯著性差異；
　　 3.對大鼠血脂的影響：實驗結束時，模型組大鼠TG、CHOL結果明顯高于正常組(P＜0.01)，中藥組和西藥組的TG結果低于模型組(P＜0.01)，中藥組與西藥組比較無顯著性差異；中藥組和西藥組的CHOL結果低于模型組(

8、P＜0.05)。中藥組與西藥組比較無顯著差異；
　　 4.對大鼠腎功能的影響：實驗結束時，模型組、中藥組、西藥組與正常組比較，血Scr、BUN的結果均無顯著性差異；
　　 5.對大鼠血清蛋白的影響：實驗結束時，模型組、中藥組、西藥組大鼠的TP、ALB結果均明顯低于正常組(P＜0.01)，中藥組和西藥組大鼠的TP、ALB結果高于模型組(P＜0.05)，而中藥組與西藥組之間無顯著性差異；
　　 6.對大鼠ET-1、V

9、EGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平的影響：模型組與中藥組的ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平均明顯升高(與正常組相比，P＜0.01)，但中藥組的ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平較模型組顯著降低(P＜0.05)，中藥組與西藥組無顯著性差異；
　　 7.病理學觀察：在光鏡下，模型組大鼠HE及PAS染色病理切片有輕度系膜增生，其它各組腎小球及腎小管均未見明顯病理變化。在電鏡

10、下，正常組大鼠腎小球基底膜未見增厚，系膜未見增生，足突清晰完整，未見融合。模型組大鼠腎小球基底膜未見增厚，局部系膜細胞、基質(zhì)增生，足突間隙消失，足突廣泛融合，尚可見部分內(nèi)皮細胞異染色質(zhì)染色加深、成塊、趨邊，核孔增寬，出現(xiàn)細胞凋亡；模型組大鼠可見部分腎小管細胞周邊水腫，溶酶體增多。中藥組和西藥組，腎小球病變程度相似，基底膜平滑，未見增厚，系膜未見增生，足突部分融合，腎小管細胞結構正常，與模型組比較，病變程度明顯較輕。
　　 結論:

11、本研究結果提示：溫陽利濕通絡方能顯著改善阿霉素誘導的腎病綜合征大鼠的一般營養(yǎng)狀況；提高阿霉素誘導的腎病綜合征大鼠血清白蛋白、總蛋白水平，降低大鼠蛋白尿、甘油三酯、膽固醇水平。該方對阿霉素誘導的腎病綜合征大鼠腎組織的超微結構有改善作用。其治療機制可能與下調(diào)ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平有關，在降低ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平的過程中，減少了中性粒細胞和單核巨噬細胞浸潤，抑制炎癥細胞

12、的聚集活化和炎癥介質(zhì)的釋放，從而減輕足突細胞損傷，減少足突融合，達到保護腎小球濾過膜的結構和功能的作用，最終降低尿蛋白，并且，因其減輕了腎臟免疫損傷，從而能調(diào)節(jié)蛋白和脂質(zhì)代謝，抑制脂質(zhì)過氧化物的形成，達到升高血清白蛋白，降低血脂的作用，因此，對ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA的研究，從細胞免疫及分子角度更深入闡明了溫陽利濕通絡方對NS治療作用的分子機制。提示：溫陽利濕通絡法及其方是中醫(yī)治療腎病綜合征的一種優(yōu)勢方法。