紅景天苷對(duì)PI3K-AKT-Gsk3-β介導(dǎo)的H9C2細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究紅景天苷對(duì)H9C2細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護(hù)作用和可能機(jī)制，為中醫(yī)藥在心肌缺血/再灌注損傷的防治中發(fā)揮更大的作用提供客觀依據(jù)。
　　方法:將H9C2細(xì)胞株接種至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，后取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)過程中，細(xì)胞分為以下4組:正常對(duì)照組(CON)組、缺氧/復(fù)氧組(I/R)組、缺氧/復(fù)氧+紅景天苷(I/R+S)組、缺氧/復(fù)氧+紅景天苷+LY294002(I/R+S+LY294002)組。①CON組:細(xì)胞置

2、于37℃、21％O2、5％CO2的正常培養(yǎng)箱中孵育24h后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè);②I/R組:用缺氧培養(yǎng)液替換正常培養(yǎng)基(10％DMEM)后置于三氣培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16h后，把缺氧液換為10％DMEM置于正常培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8h后，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè);③I/R+S組:在換缺氧培養(yǎng)液的同時(shí)加入20ul(200ug/ml)紅景天苷組，余步驟同I/R組;④I/R+S+LY294002組:在I/R+S的基礎(chǔ)上加入PI3K通道阻滯劑LY294002，阻滯劑在加紅

3、景天苷前30min加入，余步驟同I/R組。經(jīng)上述處理后，用MTT法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響;檢測(cè)培養(yǎng)液中活性氧(ROS)水平、細(xì)胞內(nèi)外乳酸脫氫酶(LDH)含量來評(píng)估細(xì)胞的損傷程度;用WesternBlot法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶-3(GSK3-β)蛋白表達(dá)水平和磷酸化狀態(tài)。
　　結(jié)果:1.MTT法檢測(cè)抑制率組間比較:①I/R、I/R+S、I/R+S+LY294002三組抑制

4、率均顯著高于CON組（P＜0.05）;②I/R顯著高于I/R+S組（P＜0.05）;③I/R+S組顯著低于I/R+S+LY294002組（P＜0.05）。
　　2.LDH含量組間比較:①細(xì)胞外LDH含量I/R+S組顯著低于I/R組(P＜0.05)，細(xì)胞內(nèi)LDH含量則顯著高于I/R組(P＜0.05);②細(xì)胞外LDH含量I/R+S組顯著低于I/R+S+LY294002組，細(xì)胞內(nèi)LDH含量則顯著高于I/R+S+LY294002組（P＜0

5、.05）;③細(xì)胞外LDH含量I/R+S+LY294002組與I/R組無顯著差異(P＞0.05)，細(xì)胞內(nèi)LDH含量I/R+紅景天苷+LY294002組略高于I/R組。
　　3.ROS含量組間比較:①I/R+S組顯著低于I/R組（P＜0.05）;②I/R+S組顯著低于I/R+S+LY294002組（P＜0.05）;③I/R+S+LY294002組與I/R組ROS含量無顯著差異(P＞0.05)。
　　4.Akt磷酸化(p-Akt)

6、蛋白的表達(dá)組間比較:①I/R組與CON組比較有所增加，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);②I/R+S組與I/R組相比，p-Akt明顯增加(P＜0.05);③I/R+S+LY294002組明顯低于I/R+S組(P＜0.05)。
　　5.GSK3-β磷酸化(p-GSK3-β)蛋白表達(dá)組間比較:①I/R組與CON組比較有所增加，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;②I/R+S組與I/R組比較p-GSK3-β明顯增加（P＜0.05）;③I/