遠(yuǎn)端創(chuàng)傷后處理通過PI3L-Akt-GSK-3β信號通路減輕缺血再灌注腦損傷研究.pdf

1、目的：本實驗應(yīng)用大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，研究遠(yuǎn)端創(chuàng)傷后處理(Remote postconditioning of trauma，RPoCT)對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響，探討RPoCT的腦保護(hù)作用是否與PI3K/Akt/GSK-3β信號通路相關(guān)。
　　方法：60只健康雄性SD大鼠，體重220～280g，隨機(jī)分為4組(n=15):假手術(shù)組（Sham組）、缺血再灌注組(I/R組)、3h遠(yuǎn)端創(chuàng)傷后處理組（3hRPoCT組）和6h

2、遠(yuǎn)端創(chuàng)傷后處理組（6hRPoCT組）。①Sham組:大鼠僅分離頸部血管，不進(jìn)行大腦中動脈梗阻，除不插入栓線外，其他手術(shù)操作步驟同I/R組。②I/R組:參照Longa制作MCAO模型方法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。阻斷大鼠右側(cè)大腦中動脈90min后施再灌注。③3hRPoCT組:建立局灶性腦缺血再灌注損傷模型方法同I/R組，在大腦中動脈再灌注后3h行于劍突下3cm處行腹部縱向切口，全長約2cm，逐層切開至臟層腹膜，切開后立即使用3-0慕

3、絲線逐層縫合傷口并消毒。④6hRPoCT組:除RPoCT在大腦中動脈再灌注后6h施加外，其他手術(shù)操作步驟同3hRPoCT組。I/R組、3hRPoCT組和6hRPoCT組于大腦中動脈再灌注恢復(fù)后觀察24h。四組大鼠于手術(shù)完成后3h、24h分別對各組大鼠用改良的神經(jīng)功能缺損評分法(modified Neurological Severity Score，mNSS)進(jìn)行評分。評分后處死大鼠取腦，用TTC染色法測定腦梗死容積;HE染色法觀察腦組

4、織形態(tài);Nissl染色法計數(shù)存活神經(jīng)細(xì)胞;免疫組化和Western blot法觀察及測定缺血測海馬區(qū)p-Akt、GSK-3β及p-GSK-3β(ser9)表達(dá)。
　　結(jié)果：①TTC染色:Sham組未見腦梗死;與I/R組比較，3hRPoCT組腦梗死容積雖有減小趨勢但無顯著差異(P＞0.05);6hRPoCT組腦梗死容積顯著減?。≒＜0.05）。②HE染色:Sham組缺血測海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，排列整齊;I/R組和RPoCT組

5、腦缺血測海馬CA1區(qū)均出現(xiàn)細(xì)胞壞死，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目減少，間隙增寬，體積減小，核固縮，染色質(zhì)濃縮、邊聚，組織疏松。但RPoCT組較I/R組腦缺血海馬CA1區(qū)細(xì)胞層次更清晰，數(shù)目多且細(xì)胞形態(tài)較完整，間質(zhì)水腫減輕。③Nissl染色:6hRPoCT組缺血測海馬區(qū)尼氏體染色平均光密度值較I/R組顯著增加(P＜0.05);3hRPoCT組缺血測海馬區(qū)尼氏染色平均光密度值較I/R有增高趨勢，差異不顯著(P＞0.05）。④免疫組化結(jié)果:兩處理組p-Akt

6、對比I/R組均有增高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);同時兩處理組GSK-3β水平也均高于I/R組，但是3hRPoCT組與I/R組比較差異不顯著(P＞0.05），6hRPoCT組則比I/R組顯著增高(P＜0.05)。⑤Western Blot結(jié)果:兩個RPoCT組p-Akt對比I/R組均顯著增高（P＜0.05）;兩個RPoCT組GSK-3β水平與I/R組相比均顯著增高(P＜0.05);6hRPoCT組的p-GSK-3β(ser9

7、)較I/R組顯著增高(P＜0.05)，3hRPoCT組雖有增高趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）。⑥神經(jīng)功能缺損評分:腦缺血再灌注24h后，3hRPoCT組與6hRPoCT組神經(jīng)功能缺損評分中位數(shù)較I/R組下降，但I(xiàn)/R組和兩RPoCT組神經(jīng)功能障礙評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：腦缺血再灌注后6h施加遠(yuǎn)端創(chuàng)傷后處理，減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，其作用機(jī)制可能與激活PI3K/Akt/GSK-3β信號通路相關(guān)。