大株紅景天對(duì)心肌缺血—再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、一、實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:探討紅景天苷對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷的防治作用和可能的機(jī)制，為中醫(yī)藥防治心肌缺血-再灌注損傷提供科學(xué)、客觀(guān)的依據(jù)。
　　方法:健康雄性清潔級(jí)SD大鼠，體重240±10g。結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支，復(fù)制心肌缺血再灌注損傷（I/R）模型，按隨機(jī)分配的原則分為6組（死亡的剔除），每組6只:假手術(shù)組(Sham)、心肌缺血-再灌注模型組(I/R)、紅景天苷預(yù)防組（紅景天苷+缺血再灌注，S+I/R）、紅景天苷治

2、療組（缺血再灌注+紅景天苷，I/R+S）、紅景天苷預(yù)防組+P13K特異性抑制劑LY294002組（S+I/R+LY組）、紅景天苷治療組+P13K特異性抑制劑LY294002組（I/R+S+LY組）。假手術(shù)組只穿線(xiàn)不結(jié)扎，直接關(guān)胸。其他各組大鼠均穿線(xiàn)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)起始部，心肌缺血30分鐘后剪斷結(jié)扎線(xiàn)，使閉塞的冠脈再通，恢復(fù)冠脈血流和心肌的再灌注，造成I/R模型。心電圖穩(wěn)定10分鐘后關(guān)胸。結(jié)扎成功的標(biāo)志為:心電圖標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)上S

3、T段上抬、QRS波出現(xiàn)形似左束支傳導(dǎo)阻滯樣的寬大畸形，左室前壁局部顏色蒼白或紫紺。冠脈再通的標(biāo)志為:抬高的ST段下降50％以上，QRS波幅變窄而低，缺血區(qū)心肌蒼白或紫紺色轉(zhuǎn)為紅潤(rùn)。紅景天苷預(yù)防組和預(yù)防組+LY組在造模前連續(xù)給藥3天，1次/日，紅景天苷12mg/kg腹腔注射;紅景天苷治療組和治療組+LY組在再灌注即刻加予紅景天苷12mg/kg腹腔注射，Sham組和I/R組均給予等量的生理鹽水腹腔注射。預(yù)防+LY組和治療+LY組于術(shù)前10m

4、in給予腹腔注射磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特異性抑制劑LY294002(溶于DMSO)，0.3mg/kg/day。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，各組大鼠經(jīng)腹主動(dòng)脈采集血樣，通過(guò)ELISA試劑盒測(cè)定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白(CTnⅠ)水平;取心肌組織，運(yùn)用Evans'blue及TTC法雙重染色，確定心肌梗死區(qū)/危險(xiǎn)區(qū)比值;運(yùn)用末端標(biāo)記法(TUNEL)染色法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡并求出心肌細(xì)胞凋亡指數(shù);采用Western Blot測(cè)定細(xì)胞內(nèi)AKT

5、、GSK3-b蛋白表達(dá)水平變化及磷酸化狀態(tài)。
　　結(jié)果:
　　1.Sham組血清CK-MB、CTnⅠ水平、心肌梗死面積，凋亡指數(shù)低于其他組，無(wú)明顯心肌缺血及梗死灶。
　　2.與I/R組相比，紅景天苷預(yù)防組和紅景天苷治療組血清CK-MB、CTnⅠ水平明顯下降，心肌梗死面積明顯縮小，凋亡指數(shù)明顯下降(P＜0.05)。
　　3.與紅景天苷預(yù)防組相比，預(yù)防+LY組血清CK-MB、CTnⅠ水平明顯上升，心肌梗死面積顯著擴(kuò)大

6、，凋亡指數(shù)明顯上升(P＜0.05)。
　　4.與紅景天苷治療組相比，治療+LY組血清CK-MB、CTnⅠ水平明顯上升、心肌梗死面積顯著擴(kuò)大、細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著升高(P＜0.05)。
　　5.紅景天苷預(yù)防組和紅景天苷治療組組間比較，血清CK-MB、CTnⅠ水平，心肌梗死面積，凋亡指數(shù)均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:紅景天苷對(duì)大鼠心肌缺血-再灌住損傷具有顯著的保護(hù)作用，推測(cè)其可能機(jī)制主要與抗氧化作用及抑制心肌細(xì)胞凋

7、亡、激活PI3K/AKT/GSK3-b信號(hào)通路等因素有關(guān)。
　　二、臨床研究
　　目的:通過(guò)臨床隨機(jī)對(duì)照的方法，研究大株紅景天注射液對(duì)急性心肌缺血患者血運(yùn)重建后心肌缺血-再灌注損傷的干預(yù)作用，并探討其可能的機(jī)制，為中藥有效預(yù)防及治療心肌缺血-再灌注損傷提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:將2013.12～2014.4在南京軍區(qū)南京總醫(yī)院心臟科和江蘇省中醫(yī)院心內(nèi)科住院，行冠脈介入治療(PCI)的患者作為研究對(duì)象，把符合西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)

8、和中醫(yī)辨證屬心血瘀阻型的患者隨機(jī)分為對(duì)照組(20例)，大株紅景天注射液治療組（30例）和丹參多酚酸鹽注射液治療組（30例），每組患者均根據(jù)指南推薦，運(yùn)用西醫(yī)常規(guī)治療，包括腸溶阿司匹林、氯吡格雷、低分子肝素、硝酸酯類(lèi)、ACEI或ARB、b-受體阻滯劑及必要的降壓、降糖治療。大株紅景天注射液治療組在西藥治療基礎(chǔ)上加予大株紅景天注射液10ml靜脈滴注，1次/日;丹參多酚酸鹽治療組在西藥治療基礎(chǔ)上加予丹參多酚酸鹽0.2g靜脈滴注，1次/日;住院

9、治療時(shí)間為3～7天。治療期間停用其他任何中藥制劑及中成藥?；颊哂赑CI術(shù)前、術(shù)后3d分別采取外周靜脈血5ml，離心取血清檢測(cè)心肌酶譜、心肌標(biāo)志物、糖脂代謝指標(biāo)、C反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞介素—6（IL—6）、腫瘤壞死因子(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)等指標(biāo)，并進(jìn)行分析比較。
　　結(jié)果:
　　1.抗氧化反應(yīng)指標(biāo):治療前后組內(nèi)比較，各組血清SOD、NO水平上升，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與對(duì)照組比

10、較，大株紅景天組與丹參多酚酸鹽組治療后血清SOD、NO水平顯著升高，P＜0.05;大株紅景天組與丹參多酚酸鹽組治療后組間比較，血清SOD、NO水平變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。
　　2.抗炎癥反應(yīng)指標(biāo):治療前后組內(nèi)比較，各組治療后血清CRP、IL-6、TNF-α水平升高，P＜0.05;與對(duì)照組比較，大株紅景天組與丹參多酚酸鹽組治療后血清CRP、IL-6、TNF-α升高水平低于對(duì)照組，P＜0.05;大株紅景天組與丹參多酚酸鹽組治療

11、后，血清CRP、IL-6、TNF-α水平組間比較，P＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1.ACS血運(yùn)重建患者在常規(guī)西藥治療基礎(chǔ)上加予大株紅景天注射液，可以保護(hù)心肌，減輕MIRI，其機(jī)制可能與提高機(jī)體抗氧化應(yīng)激反應(yīng)、抑制炎癥反應(yīng)等有有關(guān)，對(duì)臨床MIRI的防治具有一定的參考價(jià)值。
　　2.大株紅景天注射液與丹參多酚酸鹽注射液對(duì)ACS患者PCI術(shù)后心肌缺血再灌注損傷均有保護(hù)作用，兩者療效無(wú)顯著差異，但均優(yōu)于常規(guī)西藥