靶向抑制GLUT1對糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用研究.pdf

1、第一部分靶向抑制GLUT1對糖尿病小鼠視網(wǎng)膜葡萄糖轉(zhuǎn)運的作用研究
　　目的：建立糖尿病視網(wǎng)膜病變小鼠模型，觀察通過靶向抑制視網(wǎng)膜上葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-1（GLUT1）對糖尿病小鼠視網(wǎng)膜葡萄糖含量的影響。
　　方法：36只8周大小的C57BL/6小鼠按隨機數(shù)字表法分成正常對照組、糖尿病對照組和GLUT1小干擾核糖核酸（siRNA）組。腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病模型后，GLUT1siRNA組予以玻璃體腔注射1μL靶向GLUT1的s

2、iRNA，正常對照組和糖尿病對照組注射等量非靶向性siRNA。建模21周后3組小鼠行免疫印跡法檢查視網(wǎng)膜GLUT1的表達(dá)并測定比較三組小鼠視網(wǎng)膜的含糖量。
　　結(jié)果：GLUT1在神經(jīng)視網(wǎng)膜層的表達(dá)GLUT1siRNA組較正常對照組表達(dá)約下降77.00％，僅為糖尿病對照組的8.07%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。盡管糖尿病對照組和GLUT1siRNA組視網(wǎng)膜組織含糖量均高于正常對照組，但GLUT1siRNA組小鼠視網(wǎng)膜含糖量為糖尿病對照組的5

3、0.05%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；
　　結(jié)論：GLUT1 siRNA可以有效抑制GLUT1在視網(wǎng)膜中的表達(dá)，限制葡萄糖轉(zhuǎn)運進(jìn)入視網(wǎng)膜，從而降低視網(wǎng)膜含糖量。
　　第二部分負(fù)性調(diào)節(jié)葡萄糖轉(zhuǎn)運對糖尿病小鼠光感受器退行性變的作用研究
　　目的：研究限制葡萄糖轉(zhuǎn)運后對糖尿病小鼠視網(wǎng)膜光感受器退行性變的影響。方法：將前述3組小鼠行閃光視網(wǎng)膜電圖檢查視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞的功能，通過免疫熒光共定位法檢查視錐細(xì)胞的密度及形態(tài)改變。行HE染色

4、切片測量距離視乳頭上下方0.2mm、04mm、0.6mm、0.8mm、1.0mm、1.2mm、1.4mm、1.6mm、1.8mm處視網(wǎng)膜外核層厚度以檢查視桿細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：糖尿病對照組和GLUT1 siRNA組小鼠的暗適應(yīng)和明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖發(fā)現(xiàn)a波及b波振幅均低于正常對照組，但GLUT1 siRNA組較糖尿病對照組暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖高44.6%和94.9%，明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖高47.59%和42.61%，差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)

5、意義；形態(tài)學(xué)檢查分別發(fā)現(xiàn)GLUT1 siRNA組和糖尿病對照組小鼠的外核層較正常對照組薄，而GLUT1 siRNA組的外核層較糖尿病對照組小鼠厚，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。糖尿病對照組較GLUT1 siRNA組其視錐細(xì)胞排列更為稀疏，外節(jié)形態(tài)更為短小。
　　結(jié)論：GLUT1 siRNA限制葡萄糖轉(zhuǎn)運進(jìn)入視網(wǎng)膜，減輕了糖尿病小鼠視網(wǎng)膜視錐細(xì)胞和視桿細(xì)胞功能和形態(tài)學(xué)退變，對糖尿病視網(wǎng)膜病變光感受器退行性病變產(chǎn)生緩解作用。
　　第三部分：

6、負(fù)性調(diào)節(jié)葡萄糖轉(zhuǎn)運對糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管病變的作用研究
　　目的：研究限制葡萄糖轉(zhuǎn)運后對糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管病變的影響。
　　方法：將前述3組小鼠取視網(wǎng)膜組織行免疫印跡法檢查比較視網(wǎng)膜ICAM-1和TNF-α的表達(dá)水平的改變，異硫氰酸熒光素-刀豆蛋白A行心內(nèi)注射以標(biāo)記粘滯的白細(xì)胞并行視網(wǎng)膜平鋪以計數(shù)比較視網(wǎng)膜血管白細(xì)胞粘滯，異硫氰酸熒光素-牛血清白蛋白行股靜脈注射并行視網(wǎng)膜平鋪以比較血-視網(wǎng)膜內(nèi)屏障滲漏程度。
　　

7、結(jié)果：糖尿病對照組和GLUT1 siRNA組小鼠視網(wǎng)膜ICAM-1和TNF-α的表達(dá)均高于正常對照組，但這兩個炎癥因子在GLUT1 siRNA組表達(dá)僅為糖尿病對照組的66.14%和54.76%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；同時發(fā)現(xiàn)糖尿病對照組較 GLUT1 siRNA組有更多的白細(xì)胞粘附在視網(wǎng)膜血管中，視網(wǎng)膜鋪片發(fā)現(xiàn)糖尿病對照組較GLUT1 siRNA組其熒光滲漏區(qū)域較多，且滲漏面積也較大。
　　結(jié)論：GLUT1 siRNA限制葡萄糖轉(zhuǎn)運進(jìn)