CRISPR-Cas9基因敲除技術(shù)篩選前列腺癌相關(guān)miRNA功能研究.pdf

1、目的：利用CRISPR-Cas9基因敲除技術(shù)對(duì)miRNA表達(dá)譜芯片篩選到的前列腺癌差異表達(dá)的miRNAs進(jìn)行快速功能分類。
　　方法：通過CRISPR-Cas9基因敲除技術(shù)對(duì)LNCaP細(xì)胞實(shí)現(xiàn)快速而有效的基因編輯。敲除LNCaP細(xì)胞中的miR-205、miR-221、miR-455、miR-222、miR-224、miR-505、miR-23b、miR-30c-1、miR-1225和miR-663，進(jìn)行腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵襲實(shí)

2、驗(yàn)及糖酵解實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步研究miRNA的功能。
　　結(jié)果：
　　1.通過miRNA表達(dá)譜芯片篩選到的一批前列腺癌差異表達(dá)miRNAs，包括miR-205、miR-221、miR-455、miR-222、miR-224、miR-505、miR-23b、miR-30c-1、miR-1225和miR-663。
　　2.在轉(zhuǎn)染了72小時(shí)后的前列腺癌細(xì)胞中，敲除了miR-222,miR-224,miR-23b,miR-205和mi

3、R-30c的細(xì)胞的增殖能力顯著高于對(duì)照組，然而敲除了miR-1225和miR-663a的前列腺癌細(xì)胞的增殖能力顯著低于對(duì)照組。
　　3.敲除了miR-205,miR-221,miR-455,miR-222,miR-224,miR-505,miR-23b，miR-30c和miR-663a的LNCaP細(xì)胞的侵襲能力顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。
　　4.敲除了miR-505和miR-23b的LNCaP細(xì)胞增加了乳酸的產(chǎn)生(P<

4、0.01),然而敲除了miR-205,miR-221,miR-455,miR-222,miR-224,miR-30c,miR-1225和miR-663a的LNCaP細(xì)胞顯著減小了乳酸的產(chǎn)生(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.CRISPR-Cas9基因敲除技術(shù)能夠快速、有效地對(duì)miRNA進(jìn)行功能分類；
　　2.miRNA的篩選有助于臨床診療上對(duì)前列腺腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移的前瞻性判斷；
　　3.通過篩選的系列miRNA