刺芒柄花素對小鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：在小鼠腎臟缺血再灌注損傷(Ischemia Reperfusion Injury,IRI)模型中探究刺芒柄花素(Formononetin，F(xiàn)MN)對腎功能及組織結構的保護作用,并明確Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)和高遷移率族蛋白B1(High Mobility Group box-B1,HMGB1)在腎臟局部的表達及其在缺血再灌注損傷中的變化，并探究FMN的腎臟保護機制,為其臨床應用提供理論依

2、據(jù)。
　　方法：(1)選擇22-26g雄性BALB/c小鼠48只,隨機分組，即IRI組, FMN組, sham組,其中，IRI組又分為術后12、24、48、72h檢測組；FMN組分為低、中、高劑量組，每組6只。(2)建立左側腎蒂夾閉模型,sham組僅游離左側腎蒂而不結扎。于術后12、24、48、72h檢測IRI組小鼠腎組織形態(tài)和血清肌酐及尿素氮水平的變化，據(jù)此確定最佳檢測時間。(3)根據(jù)參考文獻,FMN組于手術前30min分別給予

3、尾靜脈注射FMN3、15、30mg/kg，通過HE染色及血生化測定指標確定FMN的最適濃度。(4)比較最適劑量FMN組、IRI組及sham組(IRI組及sham組均尾靜脈注射等量DMSO)在術后最佳檢測時間的腎組織形態(tài)功能變化，細胞凋亡情況及TLR4、HMGB1水平改變。(5)應用SPSS18.0軟件統(tǒng)計并分析實驗結果。
　　結果：(1)成功制備了小鼠腎IRI模型,根據(jù)查閱相關文獻及前期大量預實驗，將腎組織缺血時間定為45min。

4、(2)腎組織IRI后，血肌酐和血尿素氮值隨時間推移持續(xù)升高，在24h達到頂峰(肌酐119.81±5.19μmol/L，尿素氮50.34±2.08mmol/L，p<0.01)，然后逐漸下降。腎缺血前30min給予不同劑量FMN，腎臟IRI有不同程度的改善，以中劑量組最為顯著(肌酐27.84±8.33μmol/L，尿素氮18.61±2.78mmol/L，p<0.01)。(3)光鏡下可看到，腎臟IRI導致腎臟嚴重受損，腎小管腔擴張，腎小管上皮

5、細胞扁平且在24h最為顯著；sham組腎組織基本無病理學變化，遂將術后24h定為最佳檢測時間。缺血前30min給予低劑量FMN，腎臟IRI無明顯減輕，中劑量FMN能顯著減輕腎組織IRI,高劑量FMN對腎臟也有一定的保護作用，故中劑量(15mg/kg)為最適濃度。(4)與sham組相比，術后24h，腎組織IRI導致腎臟TUNEL陽性細胞增多，可見明顯的細胞凋亡(p<0.05)。缺血前30min尾靜脈注射FMN15mg/kg，腎臟細胞的凋亡

6、與IRI組相比明顯減少(p<0.05)。(5)腎臟IRI前，TLR4及HMGB1表達較少。IR損傷24h后，TLR4及HMGB1蛋白表達于sham組相比升高(p<0.05)，缺血前給予15mg/kgFMN，TLR4及HMGB1蛋白表達與IRI組相比顯著減弱(p<0.05)。
　　結論：FMN預處理可減輕腎臟缺血再灌注損傷，具有腎臟保護作用；HMGB1可能參與腎臟缺血再灌注后的損傷過程；FMN預處理能夠降低TLR4及HMGB1的表達