胃泌素對(duì)心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　缺血性心臟病(ischemic heart disease，IHD)嚴(yán)重威脅人類健康安全，雖然醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展使缺血的心肌盡早地實(shí)現(xiàn)了重建血運(yùn)，拯救了許多缺血心肌，但同時(shí)帶來(lái)了心肌細(xì)胞致命的損傷，造成梗死面積的增大，發(fā)生缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷。當(dāng)今世界已經(jīng)步入缺血再灌注治療的時(shí)代，如何減少缺血再灌注造成的心肌細(xì)胞損傷進(jìn)一步加重，已成為基礎(chǔ)研究者以及臨床醫(yī)生的研究熱點(diǎn)。
　

2、　I/R損傷發(fā)生的機(jī)制具有復(fù)雜性，各機(jī)制間相互影響彼此促進(jìn)。細(xì)胞凋亡和壞死是I/R損傷的重要的病理生理現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn)減少心肌細(xì)胞凋亡可顯著減少細(xì)胞死亡，可顯著減少心肌梗死面積，因此減少心肌細(xì)胞凋亡對(duì)治療I/R損傷具有重要意義。細(xì)胞凋亡是一種程序性死亡，受多種基因和凋亡信號(hào)嚴(yán)格調(diào)控，在細(xì)胞凋亡基因及信號(hào)激活的同時(shí)，機(jī)體的自我保護(hù)信號(hào)激活，如抑制凋亡的基因和促生存信號(hào)通路的激活（PI3K/Akt、ERK1/2、STAT3）。近年來(lái)對(duì)減少細(xì)胞

3、凋亡的治療策略上進(jìn)行了大量的研究，取得了較為顯著的成果，如缺血前預(yù)處理、缺血后處理以及遠(yuǎn)端缺血預(yù)處理，這些治療措施中促生存途徑或多或少參與其中，并有許多藥物及治療處理應(yīng)用于臨床，如依達(dá)拉奉，但這些成果應(yīng)用于臨床卻受到安全性等很多因素的影響，目前仍感覺束手無(wú)策，因此急需要尋找出一些新的治療措施。
　　既往發(fā)現(xiàn)飽食可減少心臟缺血再灌注造成大鼠心肌的損傷，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)Akt被激活。我們知道受進(jìn)食影響最大的是胃腸道激素，其中胃泌素在進(jìn)食后循

4、環(huán)中的濃度升高高于其他胃腸道激素，此外胃泌素具有抗調(diào)亡、營(yíng)養(yǎng)作用等生物活性，能激活機(jī)體的促生存途徑，包含RISK通路(PI3K/Akt、ERK1/2)與SAFE通路(STAT3)。因此推測(cè)胃泌素可能在飽食對(duì)心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)中發(fā)揮作用，這種保護(hù)作用可能激活了心臟的促生存途徑（PI3K/Akt、ERK1/2、STAT3）而發(fā)揮的，以上問(wèn)題的解決可能為我們尋找出一種新的治療心臟缺血再灌注損傷的策略。
　　目的：
　　明確胃

5、泌素對(duì)心臟缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，并探討胃泌素通過(guò)何種機(jī)制在心臟缺血再灌注損傷中發(fā)揮保護(hù)作用。
　　方法：
　　1.第一部分我們對(duì)胃泌素在在體心臟I/R損傷中的保護(hù)作用進(jìn)行研究，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。將SD(Sprague Dawley)大鼠左前降支結(jié)扎，30min后剪開，制備在體的心臟I/R損傷模型，24小時(shí)后檢測(cè)心肌(LDH、TnT-HSST)改變，TTC染色觀察心肌梗死面積，Tunel染色觀察心肌細(xì)胞凋亡，同時(shí)采

6、用Western Blotting方法檢測(cè)凋亡蛋白Caspase-3、Akt、ERK1/2以及STAT3蛋白磷酸化表達(dá)水平，初步了解促生存途徑在其中的作用。
　　2.第二部分我們對(duì)胃泌素在離體心臟I/R損傷的保護(hù)作用進(jìn)行研究，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探討。采用Langendorff建立離體心臟缺血再灌注損傷模型（心臟整體缺血40min，再灌注60min，在缺血前給予20min的藥物干預(yù)），在該模型中去除了神經(jīng)體液因素以及胃泌素對(duì)冠

7、脈流量的影響。左心室球囊通過(guò)壓力傳感器和橋式放大儀持續(xù)記錄心臟功能改變，收集缺血前以及再灌注60min時(shí)冠脈流出液檢測(cè)心肌酶(LDH、TnT-HSST)改變，TTC染色檢測(cè)心肌梗死面積，TUNEL染色觀察和心肌細(xì)胞凋亡情況，采用Western Blotting方法檢測(cè)Caspase-3以及Akt、ERK1/2以及STAT3磷酸化水平，并應(yīng)用Akt、ERK1/2以及STAT3拮抗劑分別阻斷它們磷酸化改變，觀察胃泌素預(yù)處理對(duì)心臟缺血再灌注損

8、傷的影響。
　　結(jié)果：
　　1.在在體缺血再灌注損傷中，胃泌素預(yù)處理后24小時(shí)心肌酶(LDH、TnT-HSST)釋放受到抑制，心梗面積縮小，心肌細(xì)胞凋亡下降，這些現(xiàn)象能被其受體拮抗劑CI988所阻斷。應(yīng)用Western Blotting方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃泌素預(yù)處理促進(jìn)了Akt、ERK1/2以及STAT3蛋白磷酸化表達(dá)。
　　2.在離體心臟缺血再灌注損傷中，胃泌素預(yù)處理可促進(jìn)缺血后心功能的恢復(fù)(LVDP、LVEDP、+dp/

9、dtmax)，減少心肌梗死面積，抑制心肌酶(LDH、TnT-HSST)釋放以及減少心肌細(xì)胞的凋亡，這些作用能被其受體拮抗劑CI988所阻斷。此外應(yīng)用Western Blotting方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃泌素預(yù)處理促進(jìn)了Akt、ERK1/2以及STAT3蛋白磷酸化表達(dá)，并應(yīng)用Akt、ERK1/2以及STAT3拮抗劑分別阻斷它們磷酸化后觀察發(fā)現(xiàn)胃泌素對(duì)心臟I/R損傷的保護(hù)作用受到抑制，表現(xiàn)為心肌梗死面積增加，心肌酶釋放增多。
　　結(jié)論：