胃泌素對心臟缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、背景：
　　缺血性心臟病(ischemic heart disease，IHD)嚴重威脅人類健康安全，雖然醫(yī)療技術的發(fā)展使缺血的心肌盡早地實現(xiàn)了重建血運，拯救了許多缺血心肌，但同時帶來了心肌細胞致命的損傷，造成梗死面積的增大，發(fā)生缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷。當今世界已經(jīng)步入缺血再灌注治療的時代，如何減少缺血再灌注造成的心肌細胞損傷進一步加重，已成為基礎研究者以及臨床醫(yī)生的研究熱點。
　

2、　I/R損傷發(fā)生的機制具有復雜性，各機制間相互影響彼此促進。細胞凋亡和壞死是I/R損傷的重要的病理生理現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn)減少心肌細胞凋亡可顯著減少細胞死亡，可顯著減少心肌梗死面積，因此減少心肌細胞凋亡對治療I/R損傷具有重要意義。細胞凋亡是一種程序性死亡，受多種基因和凋亡信號嚴格調(diào)控，在細胞凋亡基因及信號激活的同時，機體的自我保護信號激活，如抑制凋亡的基因和促生存信號通路的激活（PI3K/Akt、ERK1/2、STAT3）。近年來對減少細胞

3、凋亡的治療策略上進行了大量的研究，取得了較為顯著的成果，如缺血前預處理、缺血后處理以及遠端缺血預處理，這些治療措施中促生存途徑或多或少參與其中，并有許多藥物及治療處理應用于臨床，如依達拉奉，但這些成果應用于臨床卻受到安全性等很多因素的影響，目前仍感覺束手無策，因此急需要尋找出一些新的治療措施。
　　既往發(fā)現(xiàn)飽食可減少心臟缺血再灌注造成大鼠心肌的損傷，同時也發(fā)現(xiàn)Akt被激活。我們知道受進食影響最大的是胃腸道激素，其中胃泌素在進食后循

4、環(huán)中的濃度升高高于其他胃腸道激素，此外胃泌素具有抗調(diào)亡、營養(yǎng)作用等生物活性，能激活機體的促生存途徑，包含RISK通路(PI3K/Akt、ERK1/2)與SAFE通路(STAT3)。因此推測胃泌素可能在飽食對心臟缺血再灌注損傷的保護中發(fā)揮作用，這種保護作用可能激活了心臟的促生存途徑（PI3K/Akt、ERK1/2、STAT3）而發(fā)揮的，以上問題的解決可能為我們尋找出一種新的治療心臟缺血再灌注損傷的策略。
　　目的：
　　明確胃

5、泌素對心臟缺血再灌注損傷具有保護作用，并探討胃泌素通過何種機制在心臟缺血再灌注損傷中發(fā)揮保護作用。
　　方法：
　　1.第一部分我們對胃泌素在在體心臟I/R損傷中的保護作用進行研究，并對其機制進行初步探討。將SD(Sprague Dawley)大鼠左前降支結扎，30min后剪開，制備在體的心臟I/R損傷模型，24小時后檢測心肌(LDH、TnT-HSST)改變，TTC染色觀察心肌梗死面積，Tunel染色觀察心肌細胞凋亡，同時采

6、用Western Blotting方法檢測凋亡蛋白Caspase-3、Akt、ERK1/2以及STAT3蛋白磷酸化表達水平，初步了解促生存途徑在其中的作用。
　　2.第二部分我們對胃泌素在離體心臟I/R損傷的保護作用進行研究，并對其作用機制進行進一步探討。采用Langendorff建立離體心臟缺血再灌注損傷模型（心臟整體缺血40min，再灌注60min，在缺血前給予20min的藥物干預），在該模型中去除了神經(jīng)體液因素以及胃泌素對冠

7、脈流量的影響。左心室球囊通過壓力傳感器和橋式放大儀持續(xù)記錄心臟功能改變，收集缺血前以及再灌注60min時冠脈流出液檢測心肌酶(LDH、TnT-HSST)改變，TTC染色檢測心肌梗死面積，TUNEL染色觀察和心肌細胞凋亡情況，采用Western Blotting方法檢測Caspase-3以及Akt、ERK1/2以及STAT3磷酸化水平，并應用Akt、ERK1/2以及STAT3拮抗劑分別阻斷它們磷酸化改變，觀察胃泌素預處理對心臟缺血再灌注損

8、傷的影響。
　　結果：
　　1.在在體缺血再灌注損傷中，胃泌素預處理后24小時心肌酶(LDH、TnT-HSST)釋放受到抑制，心梗面積縮小，心肌細胞凋亡下降，這些現(xiàn)象能被其受體拮抗劑CI988所阻斷。應用Western Blotting方法檢測發(fā)現(xiàn)胃泌素預處理促進了Akt、ERK1/2以及STAT3蛋白磷酸化表達。
　　2.在離體心臟缺血再灌注損傷中，胃泌素預處理可促進缺血后心功能的恢復(LVDP、LVEDP、+dp/

9、dtmax)，減少心肌梗死面積，抑制心肌酶(LDH、TnT-HSST)釋放以及減少心肌細胞的凋亡，這些作用能被其受體拮抗劑CI988所阻斷。此外應用Western Blotting方法檢測發(fā)現(xiàn)胃泌素預處理促進了Akt、ERK1/2以及STAT3蛋白磷酸化表達，并應用Akt、ERK1/2以及STAT3拮抗劑分別阻斷它們磷酸化后觀察發(fā)現(xiàn)胃泌素對心臟I/R損傷的保護作用受到抑制，表現(xiàn)為心肌梗死面積增加，心肌酶釋放增多。
　　結論：