燈盞花素對老齡大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討燈盞花素(breviscapine,Bre)對老齡大鼠腎缺血再灌注損傷(renal ischemic/reperfusion injure,RIRI)的保護(hù)作用及其機(jī)制，為燈盞花素在臨床防治RIRI提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：將40只25月齡SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血再灌注組、小劑量Bre組、中劑量Bre組及大劑量Bre組共5組，每組8只。先切除右腎，然后阻斷左腎血流45min，恢復(fù)左腎血供24h的方法建立腎缺血再灌注損

2、傷動物模型。除假手術(shù)組外各組均需建立RIRI動物模型，實(shí)驗(yàn)各組處理如下：假手術(shù)組，開腹后切除右腎，45min后關(guān)腹，術(shù)前五天每天一次及術(shù)后一次經(jīng)尾靜脈注射同Bre組等量的生理鹽水；缺血再灌注組，術(shù)前術(shù)后用藥方法同假手術(shù)組；小劑量、中劑量及大劑量Bre組，術(shù)前五天每天一次及術(shù)后一次按時用藥，經(jīng)尾靜脈注射Bre注射液，劑量分別為小劑量Bre組(5mg/kg)、中劑量Bre組(10mg/kg)、大劑量Bre組(20mg/kg)。實(shí)驗(yàn)各組均于術(shù)

3、前30min肌注青霉素(1萬u/100g)預(yù)防感染，術(shù)后24小時處死動物，采集大鼠靜脈血檢測血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素(urea,Ur)指標(biāo)評價腎功能；取左腎采用HE染色光鏡觀察各組腎組織的變化，用硫代巴比妥酸法測定腎組織丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力；用TUNEL法檢測腎組織細(xì)胞凋亡率(apo

4、ptosis rate，AR)；用免疫組化法檢測腎組織Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的變化；用Western-blotting檢測腎組織P53活性蛋白表達(dá)量。 結(jié)果：(1)Scr和Ur：缺血再灌注組較假手術(shù)組升高(P＜0.05)；各劑量Bre組較缺血再灌注組下降(P＜0.05)；大劑量Bre組較中、小劑量Bre組降低(P＜0.05)；各Bre組組間血清Ur值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。(2)光鏡觀察：假手術(shù)組可

5、見部分的腎小球硬化、基底膜皺縮，部分的腎小管上皮細(xì)胞萎縮；缺血再灌注組見腎小管擴(kuò)張、腎小管上皮細(xì)胞水腫、部分上皮細(xì)胞核溶解、管腔內(nèi)可見腎小管上皮細(xì)胞碎片，余觀察結(jié)果同假手術(shù)組；各劑量Bre組，腎小管擴(kuò)張減輕、腎小管上皮細(xì)胞水腫有所減輕、核溶解細(xì)胞數(shù)減少，余觀察結(jié)果同假手術(shù)組。(3)MDA和SOD-缺血再灌注組較假手術(shù)組MDA量升高(P＜0.05)，SOD活力降低(P＜0.05)；各劑量Bre組較缺血再灌注組MDA量下降(P＜0.05)，

6、SOD活力升高(P＜0.05)；大劑量Bre組較中、小劑量Bre組MDA量降低(P＜0.05)，SOD活力升高(P＜0.05)；中、小劑量Bre組間的MDA、SOD無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。(4)細(xì)胞AR：缺血再灌注組較假手術(shù)組升高(P＜0.05)；各劑量Bre組均較缺血再灌注組降低(P＜0.05)；大劑量Bre組較中、小劑量Bre組降低(P＜0.05)；中、小劑量Bre組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。(5)Caspase-3、B

7、cl-2和Bax蛋白表達(dá)：缺血再灌注組均較假手術(shù)組升高(P＜0.05)；各劑量Bre組較缺血再灌注組的Caspase-3和Bax蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)；大劑量Bre組較中、小劑量Bre組Caspase-3和Bax蛋白表達(dá)降低(P＜0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)；中、小劑量Bre組間的Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。(6)P53蛋

8、白表達(dá)量：缺血再灌注組較假手術(shù)組升高(P＜0.05)；各劑量Bre組較缺血再灌注組下降(Pl＜0.05)，中、大劑量Bre組較小劑量Bre組降低(P＜0.05)；中、大劑量Bre組間p53蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 結(jié)論：老齡大鼠腎組織發(fā)生衰老的形態(tài)學(xué)改變，對缺血再灌注甚損傷敏感。缺血再灌注損傷可導(dǎo)致腎功能損害和細(xì)胞凋亡，表現(xiàn)為Scr及Ur值升高，細(xì)胞.AR增加，MDA量增加，SOD活力降低，Caspase-3、Bc

9、l-2、Bax、p53蛋白表達(dá)增強(qiáng)。Bre對大鼠：RIRI具有顯著保護(hù)作用，體現(xiàn)為，用藥后各劑量Bre組與缺血再灌注組相比，血清肌酐及尿素值降低，細(xì)胞.AR降低，MDA量降低，SOD活力增加，Bcl-2蛋白表達(dá)增強(qiáng)，Caspase-3、Bax和p53蛋白表達(dá)顯著減弱。并且大劑量Bre組較中、小劑量Bre組保護(hù)作用強(qiáng)，該保護(hù)作用可能與Bre能清除ROS，抑制Caspase-3、Bax、p53表達(dá)及促進(jìn)Bcl-2表達(dá)，從而抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。