銅及其轉(zhuǎn)運蛋白DMT1與肝癌關(guān)系的初步研究.pdf

1、背景與目的：肝癌是我國常見的惡心腫瘤，臨床上發(fā)現(xiàn)的肝癌患者大部分出于中晚期階段，只有不到30％的患者具有外科手術(shù)切除的指征，因此化療仍是目前肝癌臨床治療中不可或缺的組成部分。傳統(tǒng)的化療藥物如鉑類等由于較強的毒副作用及日益突出的耐藥性問題而極大地限制了其臨床療效，因此開發(fā)非鉑類金屬抗癌藥物成為新的研究方向。目前銅類化療藥物研究進展緩慢，因此本研究延續(xù)本課題組既往的研究思路，繼續(xù)通過檢測銅相關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白—二價金屬離子轉(zhuǎn)運體-1（DMT1）在肝

2、細胞癌組織中的表達來探討其臨床及病理學(xué)意義，并初步研究無機二價銅離子的體外抗肝癌細胞活性及其可能的相關(guān)作用機制。
　　材料和方法：
　　1、采用SP免疫組織化學(xué)方法檢測57例肝細胞癌組織及15例正常肝組織中DMT1的表達情況；
　　2、采用MTT法設(shè)計7個藥物濃度梯度（0、10、50、100、150、200、500μmol/L)及3個作用時間點（24h、48h、72h）來檢測Cu2+在體外對肝癌HepG2細胞增殖的影響

3、，并觀察其是否存在劑量（或）和時間相關(guān)性；
　　1、采用Annexin V/PI雙染法流式細胞術(shù)測定Cu2+對肝癌HepG2細胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　1、SP免疫組化結(jié)果顯示：DMT1在肝細胞癌組織中陽性表達率顯著升高(78.9%)，與正常肝組織比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)；不同分化程度癌組織間DMT1的表達量隨著分化程度的降低而升高（F=4.011，P<0.05）；DMT1陽性表達率與臨床分期無關(guān)(P>0

4、.05)，與是否有血管浸潤也無關(guān)(P>0.05)；
　　2、MTT結(jié)果顯示：Cu2+對HepG2細胞在不同濃度及不同作用時間產(chǎn)生不同的影響：當(dāng)藥物濃度在0～10μmol/L時，HepG2細胞的48h濃度-抑制曲線表明隨著藥物濃度的增大，細胞增殖的抑制率逐漸下降，甚至達到負值以下；而在其他藥物濃度和作用時間點則表明隨著藥物濃度的增大，細胞增殖的抑制率逐漸升高；
　　3、流式細胞術(shù)結(jié)果顯示：在含不同Cu2+濃度的藥物作用48h后

5、，HepG2細胞呈現(xiàn)出不同程度的細胞凋亡典型形態(tài)特征：未加藥處理的HepG2細胞形態(tài)成呈長梭形，多角，核質(zhì)豐富，核漿比大，并可見核分裂相；含Cu2+藥物作用48h后，細胞開始變圓，細胞體積逐漸變小、皺縮，隨著藥物濃度的增大，變圓、體積變小、皺縮的細胞數(shù)目增多，胞內(nèi)空泡增加，包膜完整性遭到破壞，細胞脫落增加，呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。流式結(jié)果顯示相同濃度的含Cu2+藥物分別作用48h、72h后 HepG2細胞總調(diào)亡率分別為35.95±0.98