兩種人類傳染病相關(guān)蛋白的表達(dá)、純化及結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）和腸道病毒68型（Enterovirus68，EV68）是嚴(yán)重威脅到公共健康的RNA病毒，目前尚未研制出高效的特異性抗病毒藥物和疫苗，因此探索病毒的復(fù)制機(jī)制以及新的藥物靶點(diǎn)一直都是病毒學(xué)領(lǐng)域研究的重難點(diǎn)。本研究希望通過(guò)對(duì)與病毒復(fù)制相關(guān)的兩種蛋白結(jié)構(gòu)和功能的研究，為病毒的致病機(jī)理以及設(shè)計(jì)靶向藥物奠定良好的基礎(chǔ)。
　　HIV是一種感染人類免疫系統(tǒng)細(xì)胞的

2、逆轉(zhuǎn)錄病毒，分為HIV-1和HIV-2型，其中HIV-1型是在全球范圍內(nèi)流行的艾滋病的主要病原體。宿主細(xì)胞為抑制病毒復(fù)制表達(dá)了限制性因子 APOBEC3H，其 HapⅡ亞型最穩(wěn)定且具有強(qiáng)抗病毒活性和抑制轉(zhuǎn)座子能力，能與HIV-1 Vif蛋白結(jié)合并被Vif拮抗了抗病毒作用，因而被廣泛的關(guān)注和研究。本研究利用昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)出大量可溶性A3H hapII蛋白，并證明其能夠與HIV-1 Vif特異性的結(jié)合。我們將構(gòu)建好的A3H hapII-H

3、is重組粘粒Bacmid轉(zhuǎn)染至昆蟲(chóng)sf9細(xì)胞并通過(guò)擴(kuò)增獲得第三代病毒，進(jìn)而感染sf9細(xì)胞表達(dá)和得到目的蛋白。經(jīng)Ni-NAT親和層析純化的目的蛋白，通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)與HIV-1 Vif之間的特異性結(jié)合。本論文研究?jī)?nèi)容成功建立A3H hapII昆蟲(chóng)表達(dá)體系，為進(jìn)一步研究A3H hapII與HIV-1 Vif之間相互作用機(jī)制并針對(duì)其相互作用位點(diǎn)設(shè)計(jì)抗HIV藥物奠定了基礎(chǔ)。
　　EV68是一種主要感染呼吸道的RNA病毒。近幾年，不同

4、地區(qū)及國(guó)家都有不同程度的EV68型感染疫情爆發(fā)，因此 EV68病毒引起了廣泛的關(guān)注。EV68病毒基因組編碼7種非結(jié)構(gòu)蛋白和4種結(jié)構(gòu)蛋白，其中非結(jié)構(gòu)蛋白3A在復(fù)制復(fù)合物中具有重要的作用。3A蛋白的可溶區(qū)N端（1-61）對(duì)3A的生物學(xué)功能有重要意義，但目前關(guān)于EV68型3A-N結(jié)構(gòu)的研究報(bào)道較少。本研究主要通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)出大量且高純度的3A-N蛋白并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步研究。我們將構(gòu)建的原核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌 BL21（DE3），