AMD3100抑制CXCR4-β-catenin信號通路抑制神經(jīng)干細胞遷移分化的體外研究.pdf

1、目的：
　　探討AMD3100通過CXCR4/β-catenin信號通路對中樞性神經(jīng)干細胞增殖、遷移和分化的抑制作用。
　　方法：
　　1、懸浮法培養(yǎng)中樞神經(jīng)干細胞，配制含AMD3100不同濃度梯度（0ug/L，40ug/L,80ug/L,160ug/L,320ug/L,640ug/L和1000ug/L）的培養(yǎng)基培養(yǎng)神經(jīng)干細胞。分別在2小時、24小時、48小時、72小時用CCK8法檢測各濃度梯度OD值，再分別計算各時間

2、時的增殖抑制率。
　　2、根據(jù)前一步AMD3100抑制中樞神經(jīng)干細胞增殖實驗結(jié)果選擇最適藥物濃度為80ug/L和最佳作用時間為48小時。分別培養(yǎng)對照組（0ug/L）和AMD3100組（80ug/L）中樞神經(jīng)干細胞48小時，劃痕實驗檢測細胞遷移能力的變化，Western Blot檢測神經(jīng)干細胞標志物Nestin、神經(jīng)元細胞標志物β-tubulin、Wnt、β-catenin和β-catenin（P-Tyr489）的表達情況。

3、　　結(jié)果：
　　1、CCK8法檢測結(jié)果：各濃度梯度的AMD3100作用于神經(jīng)干細胞后，隨著時間的延長，80ug/L,160ug/L,320ug/L,640ug/L和1000ug/L各濃度下增殖能力逐漸降低，抑制率逐漸增高，在48小時和72小時，增殖能力均極顯著低于0ug/L，差別具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），抑制率均達到50％以上；40ug/L濃度時增殖能力與0ug/L相比無明顯差異（P＞0.05）。在2小時和24小時，隨著濃度

4、的增加各濃度梯度抑制率逐漸增加；在48小時和72小時160ug/L,320ug/L和640ug/L抑制率呈增加趨勢，均低于80ug/L和1000ug/L，均高于24小時各濃度梯度抑制率。
　　2、劃痕實驗結(jié)果：在48小時AMD3100組細胞遷移面積百分比為(19.80%±1.83)，明顯低于對照組（32.92%±2.64），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Western Blot檢測48小時AMD3100組Nestin、β-t

5、ubulin、β-catenin和β-catenin（P-Tyr489）的表達量均低于與對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。兩組Wnt的表達量無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、AMD3100抑制中樞神經(jīng)干細胞的增殖具有時間和濃度依賴性。
　　2、AMD3100抑制SDF-1/CXCR4軸可以抑制中樞神經(jīng)干細胞的遷移和分化能力。
　　3、AMD3100可能是通過CXCR4/β-catenin