CXCR4抑制劑AMD3100對(duì)三陰性乳腺癌放射增敏作用的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是乳腺癌分子亞型中的一個(gè)特殊分型，具有發(fā)病年齡輕、惡性程度高、進(jìn)展快、侵襲性強(qiáng)、易轉(zhuǎn)移及預(yù)后差等特點(diǎn)。目前TNBC缺乏內(nèi)分泌治療及靶向治療的相關(guān)靶點(diǎn)，在臨床實(shí)踐中，除手術(shù)切除外，主要以蒽環(huán)類為基礎(chǔ)的化療以及聯(lián)合放射治療為主。放射治療是乳腺癌綜合治療主要手段之一，能夠提高局部控制率，減少因局部未控而導(dǎo)致的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，但由于TNBC

2、存在固有的和(或)獲得性的放療阻抗，從而導(dǎo)致放射治療失敗。我們課題組以及其他學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子受體4（CXCR4）在TNBC中表達(dá)率明顯高于non-TNBC患者，且CXCR4高表達(dá)者局部復(fù)發(fā)率和死亡率均高于低表達(dá)者。同時(shí)，還有研究表明，聯(lián)合應(yīng)用CXCR4抑制劑AMD3100可提高腦惡性膠質(zhì)瘤、前列腺癌等的放療敏感性。但是，CXCR4抑制劑AMD3100是否影響TNBC的放療敏感性，目前尚未查閱到相關(guān)報(bào)道。本研究的目的旨在研究應(yīng)用CX

3、CR4抑制劑AMD3100對(duì)TNBC放療療效的影響，并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　材料和方法:
　　1.選用高表達(dá)CXCR4的TNBC細(xì)胞株MDA-MB-231作為研究對(duì)象。
　　2.體外研究部分：使用CXCR4抑制劑AMD3100對(duì)TNBC放療的影響，采用不同濃度的CXCR4抑制劑AMD3100處理TNBC細(xì)胞，研究TNBC細(xì)胞CXCR4受體抑制后，細(xì)胞對(duì)放療敏感性的變化，分別檢測(cè)半數(shù)抑制濃度（IC50）、克隆形成率、凋亡

4、率和細(xì)胞周期的變化情況。采用Western blotting技術(shù)檢測(cè)使用CXCR4抑制劑AMD3100后，放療對(duì)TNBC細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的變化。
　　3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分：使用TNBC細(xì)胞株MDA-MB-231構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型，探討CXCR4抑制劑AMD3100聯(lián)合放療對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)蛋白的變化。采用TUNEL染色檢測(cè)細(xì)胞的凋亡指數(shù)（AI）。
　　結(jié)果:
　　1. CXCR4

5、抑制劑AMD3100增強(qiáng)TNBC細(xì)胞對(duì)放療的敏感性。應(yīng)用CXCR4抑制劑 AMD3100，放射治療處理 MDA-MB-231細(xì)胞，72h后 IC50明顯降低（0Gy854.47±15.03μg/ml vs.2Gy92.28±4.07μg/ml vs.4Gy1.18±0.15μg/ml p<0.01）。同時(shí)抑制CXCR4聯(lián)合放療后，細(xì)胞克隆形成率明顯下降，（p<0.05）。對(duì)照組：AMD3100組：放療組：AMD3100組聯(lián)合放療組的克隆

6、形成率分別為:54.33±2.08％vs.42.61±3.05%vs.19.66±2.51%vs.10.66±1.15%。
　　2. CXCR4抑制劑AMD3100增強(qiáng)放療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡以及G2/M期細(xì)胞阻滯。CXCR4抑制劑 AMD3100、放療、CXCR4抑制劑 AMD3100聯(lián)合放療處理組MDA-MB-231細(xì)胞 G2/M期的比例較對(duì)照組分別增加47.89%、79.08%及137.25%（ p<0.01），并且凋亡率增高，分

7、別為4.33±0.66%、15.0±0.99%、26.86±1.35% vs.1.45±0.08%（p<0.01）。
　　3. CXCR4抑制劑AMD3100聯(lián)合放療調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)促進(jìn)TNBC細(xì)胞的凋亡。Western blotting和免疫組化結(jié)果均顯示，CXCR4抑制劑AMD3100聯(lián)合放療后，TNBC細(xì)胞野生型p53、Bax和caspase-3表達(dá)上調(diào)，而CXCR4、Bcl-2表達(dá)水平下降。
　　4.動(dòng)物體內(nèi)實(shí)

8、驗(yàn)證明，CXCR4抑制劑AMD3100可以使腫瘤生長(zhǎng)緩慢、體積變小，增強(qiáng)放療的抗癌作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。AMD3100組、放療組、AMD3100聯(lián)合放療組的腫瘤體積較對(duì)照組分別縮小了52.30%、79.64%、87.28%（p<0.01）。對(duì)照組、AMD3100組、放療組及AMD3100聯(lián)合放療組的凋亡率分別為：1.833±0.76%、7.83±2.56%、11.84±2.02%、21.34±4.16%（p<0.01）。