參葉緩癡膠囊對(duì)改善大鼠慢性腦缺血所致認(rèn)知功能障礙動(dòng)物模型的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)采取雙血管結(jié)扎(2VO)改良法制造大鼠VCI動(dòng)物模型，觀測(cè)參葉緩癡膠囊（SHC）對(duì)血管性認(rèn)知功能障礙（VCI）大鼠動(dòng)物模型在行為學(xué)、腦內(nèi)神經(jīng)介質(zhì)含量及相關(guān)調(diào)節(jié)酶的變化情況的影響，探討SHC在改善VCI方面的作用機(jī)制，利用中醫(yī)藥的優(yōu)勢(shì)和特色不斷的豐富中醫(yī)藥防治認(rèn)知功能障礙理論學(xué)說(shuō)內(nèi)涵，進(jìn)一步深化中醫(yī)藥防治認(rèn)知功能障礙的機(jī)理研究，為藥物開(kāi)發(fā)提供新的思路和依據(jù)。
　　方法：將Wistar大鼠60只，體重在200-220g,雌雄

2、各占一半，將大鼠隨機(jī)分為六組，即假手術(shù)組(SOG)、模型組（MG）、吡拉西坦陽(yáng)性對(duì)照組(PG)，參葉緩癡膠囊高劑量組（SHG）、參葉緩癡膠囊中劑量組(SMG)、參葉緩癡膠囊低劑量組(SLG)、假手術(shù)組(SOG)。每組10只。模型復(fù)制采用3％濃度戊巴比妥鈉（2ml/kg腹腔注射）將大鼠麻醉后，仰臥位固定，頸部正中切口，長(zhǎng)約2cm，仔細(xì)剪毛并消毒，切開(kāi)大鼠皮膚后，一層一層鈍性分離皮下組織及肌肉等，盡可能暴露雙側(cè)頸動(dòng)脈，用手術(shù)線在頸總動(dòng)脈兩頭

3、的近心端和遠(yuǎn)心端分別打結(jié)?？p合皮膚，回籠飼養(yǎng)。假手術(shù)組動(dòng)物操作同模型組，不結(jié)扎動(dòng)脈血管。各組從造模型第2天開(kāi)始經(jīng)灌胃給藥，給藥劑量分別為：參葉緩癡膠囊高劑量組3g/kg、中劑量組1.5g/kg、低劑量組0.75g/ kg；陽(yáng)性對(duì)照組吡拉西坦片0.6g/ kg、假手術(shù)組和模型組給同體積純凈水。連續(xù)給藥5周。給藥期結(jié)束后，進(jìn)行行為學(xué)及腦組織等相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。觀察指標(biāo)：（1）采用Morris水迷宮法進(jìn)行動(dòng)物行為學(xué)測(cè)試，觀察動(dòng)物逃避潛伏期和空間探

4、索行為。（2）ELISA法測(cè)定相關(guān)神經(jīng)介質(zhì)和酶：檢測(cè)腦組織中AChE、DA、NE、5-HT、SOD、MDA等變化情況。
　　結(jié)果：（1）逃避潛伏期時(shí)間：參葉緩癡膠囊對(duì)血管性認(rèn)知功能障礙動(dòng)物模型逃避潛伏期的影響。本研究采用Morris水迷宮法，以動(dòng)物每天訓(xùn)練時(shí)分別從四個(gè)象限尋找安全平臺(tái)所花費(fèi)的時(shí)間的平均值作為當(dāng)日的逃避潛伏期值，與對(duì)照組比較，模型組動(dòng)物水迷宮逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)（P＜0.05）。與MG比較，SHG組動(dòng)物在測(cè)試第4、5、

5、6天水迷宮逃避潛伏期縮短（P＜0.05），SMG組動(dòng)物在第6天迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)中逃避潛伏期時(shí)間短于MG（P＜0.05），提示參葉緩癡膠囊對(duì)VCI模型動(dòng)物逃避潛伏期行為有一定的改善作用。（2）Morris空間探索：參葉緩癡膠囊對(duì)VCI模型大鼠空間探索行為的影響，以大鼠在水中自由游泳2min內(nèi)實(shí)時(shí)記錄大鼠運(yùn)動(dòng)軌跡，并計(jì)算大鼠經(jīng)過(guò)平臺(tái)所在位置的次數(shù)、平臺(tái)停留時(shí)間、有效區(qū)停留時(shí)間、運(yùn)行總路程，作為空間探索行為的觀測(cè)指標(biāo)。結(jié)果顯示，MG動(dòng)物水迷宮

6、空間探索航行測(cè)試2min內(nèi)經(jīng)過(guò)原平臺(tái)所放位置的次數(shù)顯著減少（P＜0.05），提示大鼠空間探索行為能力下降。與MG比較，PG和給藥組動(dòng)物2min內(nèi)穿過(guò)平臺(tái)次數(shù)顯著增加（P＜0.05）；MG動(dòng)物水迷宮單位時(shí)間內(nèi)經(jīng)過(guò)平臺(tái)停留時(shí)間明顯減少（P＜0.05），提示其空間探索行為能力下降。與MG比較，PG和給藥組大鼠2min內(nèi)經(jīng)過(guò)原平臺(tái)停留時(shí)間明顯增長(zhǎng)（P＜0.05）；MG動(dòng)物水迷宮單位時(shí)間內(nèi)有效區(qū)停留時(shí)間明顯減少（P＜0.05），提示其空間探索行為

7、能力下降。與MG比較，PG和給藥組動(dòng)物2min內(nèi)在有效區(qū)停留的時(shí)間明顯增加（P＜0.05），提示參葉緩癡膠囊對(duì)VCI模型動(dòng)物有促進(jìn)作用；MG動(dòng)物水迷宮單位時(shí)間內(nèi)運(yùn)行總路程明顯減少（P＜0.05），提示其空間探索行為能力下降。與MG比較，PG和給藥組動(dòng)物單位時(shí)間內(nèi)運(yùn)行總路程明顯增加（P＜0.05）。（3）參葉緩癡對(duì)VCI模型動(dòng)物腦組織SOD和MDA含量的影響。結(jié)果表明，MG大鼠腦組織勻漿液含量測(cè)試SOD活力有所下降（P＜0.01），且MD

8、A含量升高（P＜0.05），機(jī)體在腦缺血時(shí)對(duì)清除超氧陰離子自由基的能力會(huì)下降。與MG比較，參葉緩癡膠囊給藥各組動(dòng)物腦組織勻漿液中SOD活力升高，MDA含量下降，提示藥物可能通過(guò)增加組織的抗氧化能力對(duì)腦細(xì)胞起保護(hù)作用。對(duì)慢性腦缺血認(rèn)知功能障礙模型動(dòng)物腦組織單胺類神經(jīng)介質(zhì)含量的影響：多種神經(jīng)介質(zhì)通過(guò)突觸傳遞參與學(xué)習(xí)記憶過(guò)程的調(diào)節(jié)，其中包含的單胺類介質(zhì)去甲腎上腺素（NE）、五羥色胺（5-HT）以及多巴胺（DA）都具有舉足輕重的調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)

9、研究表明，參葉緩癡膠囊可不同程度的提高模型動(dòng)物單胺類介質(zhì)的含量（P＜0.05，＜0.01），提示參葉緩癡膠囊對(duì)VCI模型動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶的改善作用可能和增加大腦單胺類重要神經(jīng)介質(zhì)的含量有關(guān)。參葉緩癡膠囊對(duì)VCI模型動(dòng)物腦組織乙酰膽堿酯酶活性的影響：特別是能使乙酰膽堿（ACh）水解成膽堿和乙酸的乙酰膽堿酯酶(AchE)，因?yàn)锳chE不僅參與膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞過(guò)程的調(diào)節(jié)，而且乙酰膽堿相關(guān)酶（AchE）等對(duì)學(xué)習(xí)記憶過(guò)程有明顯的影響。本試驗(yàn)研究表

10、明，與MG比較，SHG和SMG動(dòng)物腦組織AchE活力下降（P＜0.05），提示參葉緩癡改善VCI模型動(dòng)物的學(xué)習(xí)和記憶能力與減少大腦組織內(nèi)AChE的分解，從而提高ACh含量有關(guān)。
　　結(jié)論：通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究表明：（1）參葉緩癡膠囊對(duì)慢性腦缺血認(rèn)知功能障礙模型動(dòng)物逃避行為、平臺(tái)停留時(shí)間、有效區(qū)停留時(shí)間及運(yùn)行總路程有改善作用，對(duì)模型動(dòng)物的認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶能力有一定的促進(jìn)作用。其作用機(jī)制可能與藥物調(diào)節(jié)記憶功能相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)；（2）參葉緩