不同感染狀態(tài)結(jié)核病牛免疫應答差異分析及分子標識篩選.pdf

1、不同感染狀態(tài)的結(jié)核病牛對牛群健康的影響不同，結(jié)核潛伏感染患牛(LTBI)通常是指患牛體內(nèi)存在牛分枝桿菌，結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應呈陽性，但無臨床癥狀，也不排菌。在某些情況下，患牛可以一生持續(xù)感染而不發(fā)病。而活動性結(jié)核患牛，又稱開放性結(jié)核患牛，是指具有明顯臨診癥狀的結(jié)核菌素陽性牛，這種病?？蓮谋欠置谖?、乳汁和糞便不斷排出病原菌，因而對周圍的健康牛群和人類造成具大威脅，應立即撲殺。目前，牛結(jié)核病主要的臨床檢測方法有結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應、IFN-

2、γ釋放試驗和血清學檢測等。但這些方法無法確定結(jié)核病牛所處的感染狀態(tài)，為了彌補這一缺陷，本研究擬通過對不同感染狀態(tài)的結(jié)核病牛進行基因表達譜芯片分析，從而篩選出差異基因，并進行驗證，以探究其作為檢測不同感染狀態(tài)結(jié)核病牛的分子標識的潛力。具體開展了以下研究工作:
　　為了對不同感染狀態(tài)的結(jié)核病牛進行基因表達譜芯片分析，本研究通過結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應、IFN-γ釋放試驗和鼻拭子巢式PCR檢測，篩選了3個牛場共368頭奶牛，最終選定了5頭牛

3、為開放性結(jié)核患牛，6頭牛為潛伏感染結(jié)核患牛，5頭健康牛。將以上牛分別設置為開放性結(jié)核組、潛伏感染結(jié)核組和健康組，采集外周抗凝血，分離外周血淋巴細胞，采用PPD-B進行刺激，6-8 h后收取細胞，提取細胞RNA，采用Bovine（牛）Affymetrix3IVT基因表達芯片進行表達譜檢測。
　　通過對各組表達譜差異分析，篩選出7個可能有作為分子標識的差異基因，基因標志分別為:BOLA、LOC508666、BOLA-DQB、DDX3Y

4、、UTY、LOC781494、LOC786808。根據(jù)其基因序列設計實時熒光定量PCR引物，并對6個樣品進行驗證，同時通過結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應、IFN-γ釋放試驗和鼻拭子巢式PCR檢測對其所處的感染狀態(tài)進行驗證。結(jié)果顯示有C-Cmotif chemokine23、majorhistocompatibility complex, classⅡ, DQ beta和non-classical MHC classⅠ antigen這3個基因在開