日本七鍶鏝Btk的原核表達、抗體制備及相關免疫學研究.pdf

1、遼寧師范大學碩士學位論文日本七鍶鏝Btk的原核表達、抗體制備及相關免疫學研究姓名：趙靜申請學位級別：碩士專業(yè)：海洋生物學指導教師：李慶偉2012-04日本七鰓鰻B t k 的原核表達、抗體制備及相關免疫學研究P r o k a r y o t i c e x p r e s s i o n ，a n t i b o d i e sp r e p a r a t i o n a n d i m m u n o l o g i c a ls

2、 t u d i e so f B t k f r o m L a m p e t r a j a p o n i c aA b s t r a c tB r u t o n ’st y r o s i n ek i n a s e ( B t k ) i sac y t o p l a s m i cn o n —r e c e p t o rt y r o s i n ek i n a s ew h i c hi se s s e

3、n t i a lf o rB c e l ld e v e l o p m e n ta n df u n c t i o ni na d v a n c e dv e r t e b r a t e s ．B t k p a r t i c i p a t e sb o t hi na d a p t i v e i m m u n i t ya n di n n a t ei m m u n i t y ．T h ei n n a

4、 t ei m m u n er e s p o n s ei nv e r t e b r a t e si s t h ef i r s t l i n e f o r r e s i s t i n g t h e i n v a d i n g m i c r o o r g a n i s m s ．P h a g o c y t e s ，s u c h a s n e u t r o p h i l s ，m a c r

5、o p h a g e sa n dd e n d r i t i cc e l l s ，p l a yi m p o r t a n tr o l e si nt h ei n n a t ei m m u n er e s p o n s e ．I nt h ea d a p t i v e i m m u n i t y ，t h em o s t c r i t i c a l f u n c t i o n a n dm o

6、 s t s t u d i e d i s t h ef u n c t i o n i n Bc e l ls i g n a l i n g ．W h a ts p e c i e sd i dB t ki n i t i a l l yp l a yi t sa d a p t i v e i m m u n ef u n c t i o ni n ? H o m o l o go f B T Kh a s a l s ob e

7、 e ni d e n t i f i e d i nt h e c a r t i l a g i n o u s f i s h R a j ae g l a n t e r i a ，a n d i t i s b e l i e v e d t ob ei n v o l v e d i nB —c e l ld e v e l o p m e n t ．R e c e n tr e s e a r c hs u g g e s

8、 t e d t h eo r i g i no f t h ea d a p t i v ei m m u n es y s t e m d a t e d b a c kt o t h e ja w l e s s v e r t e b r a t e l a m p r e y ．T h e s t u d y o f ja w l e s s v e r t e b r a t e sp r o v i d e sa t h

9、e o r e t i c a lb a s i sf o rt h eo r i g i no f a d a p t i v ei m m u n i t y ．E a r l y w o r k si no u r l a b o r a t o r yh a d c e r t i f i e d t h a t B T Ki s p r e s e n t i n L a m p e t r aj a p o n i c a

10、．W h i l eh o wB t kf u n c t i o n i n L ．j a p o n i c a ? T h i s w i l lb ef lb r e a c h t o s t u d y t h ea d a p t i v ei m m u n es y s t e mi nja w l e s sl a m p r e y ．I nt h i s p a p e r ，ac o n s e r v a t

11、 i v ek i n a s ed o m a i no f L ．j a p o n i c aB t k w a s l i n k e d w i t ht h ev e c t o rp E T 一3 2 a ．T h ef u s i o np r o t e i nw a se x p r e s s e di nt h eE ．c o l iB L 2 1 a n dp u r i f i e df r o mi t ．

12、R a b b i ta n t i —B t kp o l y c l o n a la n t i b o d i e sw e r e p u r i f i e da f t e rt h er a b b i tw a s i m m u n e d b y 三．j a p o n i c aB t kr e c o m b i n a n tp r o t e i na n ds o m ei m m u n o l o g

13、 i c a ls t u d i e sw e r ec a r r i e do u ta f t e rt h a t ．R e a l —t i m eP C R s h o w e db r o a dd i s t r i b u t i o no fB T K i nv a r i o u si m m u n e —a s s o c i a t e dt i s s u e s ，a n da f t e rL ．j

14、a p o n i c aw a ss t i m u l a t e dw i t h L P S ，t h e l e v e l o fB T K m R N A w a s n o t a b l y u p —r e g u l a t e d i nl e u k o c y t e s ．F l o wc y t o m e t r i ca n a l y s e sa n dw e s t e r nb l o td

15、e m o n s t r a t e dt h a tB t kw a se x p r e s s e di n t h el e u k o c y t e s ，a n d t h el e v e lo f B t k i n l e u k o c y t e sw a s n o t a b l y u p —r e g u l a t e da f t e r 三．j a p o n i c aw a ss t i m

16、u a t e dw i t hL P S ．F A C S r e s u l t ss h o w e d t h a tV L R B a n dB t k p r e s e n ti nt h es a m el e u k o c y t e sp o p u l a t i o n ．T h e s er e s u l t si n d i c a t e dt h a tB t k m a y p l a ya ni

17、m p o r t a n t r o l ei n i m m u n er e s p o n s ea n dm a y p a r t i c i p a t ei nt h e s i g n a l i n gs t a r t e d b yv a r i a b l el y m p h o c y t er e c e p t o r s ( V L R ) i n ￡．j a p o n i c a ．T h e s

18、 e m a y p r o v i d es o m er e f e r e n c e f o rf u r t h e rs t u d i e sa b o u tt h eo r i g i na n de v o l u t i o no f a d a p t i v ei m m u n i t y ．K e y W o r d s ：B T K ；L a m p e t r a j a p o n i c a ；S