NM23-M1基因的原核表達(dá)、抗體制備及其生物學(xué)活性的初步研究.pdf_第1頁
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1、 本研究擬通過構(gòu)建nm23-M1基因原核表達(dá)載體，制備抗nm23-M1多克隆抗體，并進(jìn)一步對(duì)其在胚胎植入過程中的作用作初步的探討。 方法是提取小鼠組織中的總RNA，運(yùn)用RT-PCR方法和基因克隆技術(shù)獲得nm23-M1基因片段，將目的片段轉(zhuǎn)入質(zhì)粒載體pQE30，構(gòu)建pQE30/nm23-M1重組子，用酶切和雙向DNA測(cè)序進(jìn)行鑒定。然后用表達(dá)的重組蛋白免疫新西蘭兔，獲得抗nm23-M1抗體。最后對(duì)妊娠第2天(D2)的小鼠進(jìn)行腹腔

2、注射，觀察胚泡著床數(shù)的變化以及子宮內(nèi)膜組織中nm23-M1蛋白表達(dá)量的變化規(guī)律。結(jié)果指出：pQE30/nm23-M1能在大腸桿菌中表達(dá)具有生物學(xué)活性的可溶性蛋白質(zhì)，并通過親和層析分離純化出nm23-M1重組蛋白；Western blot分析和免疫組織化學(xué)分析結(jié)果表明，子宮內(nèi)膜組織中的nm23-M1蛋白的表達(dá)量也隨著抗體注射量的增加呈遞減的趨勢(shì)。提示在胚泡植入過程中，nm23家族成員可能通過與多種基因和蛋白的相互作用，在調(diào)節(jié)小鼠胚泡植入甚

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