日本七鰓鰻IRF基因克隆、表達抗體制備及相關免疫學研究.pdf

1、IRF因在病毒感染時能夠結(jié)合到干擾素基因的啟動子上，誘導調(diào)節(jié)干擾素的表達而得名。作為多功能轉(zhuǎn)錄因子，IRF在干擾素基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細胞因子信號轉(zhuǎn)導、造血干細胞發(fā)育、腫瘤的抑制以及病毒感染后的免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要作用，這使得IRF成為重要的免疫調(diào)節(jié)因子以及腫瘤治療的潛在藥物靶點。
　　七鰓鰻在進化地位上處于無脊椎動物與脊椎動物之間。作為最古老的無頜類脊椎動物的代表，七鰓鰻擁有著獨特的進化地位和適應性免疫系統(tǒng)。鑒于IRF在脊柱動物

2、的免疫系統(tǒng)中所特有的防御機制，七鰓鰻的IRF具備怎樣的免疫應答體系以及是否具有腫瘤抑制功能呢？目前有關七鰓鰻IRF的研究尚不清楚。而我們首次對于日本七鰓鰻IRF的初步探究，無論是在起源與進化上還是在IRF的新功能的研究上將具有非常重要的意義。
　　本研究通過PCR的方法擴增得到長550bp的日本七鰓鰻IRF核苷酸序列。選取長372bp的IRF開放閱讀框，重新克隆和構(gòu)建IRF原核表達載體。用原核表達及親和純化得到的較純的IRF重組蛋

3、白作為抗原免疫新西蘭兔，制備兔抗日本七鰓鰻IRF多克隆抗體。用ELISA和Western blot方法檢測純化后的多克隆抗體的效價和特異性，得到效價為1∶51萬且具有良好特異性識別能力的兔抗日本七鰓鰻IRF多克隆抗體。進一步對IRF進行相關的免疫學研究。Western blot結(jié)果顯示，IRF分子主要表達于日本七鰓鰻的心、鰓、腎和髓樣組織中。同時，免疫組化結(jié)果也顯示IRF主要表達于上述四個組織中。受到HMGB1刺激后的免疫組化結(jié)果顯示，