45247.大鼠肌肉素基因克隆、融合表達(dá)及多克隆抗體制備

1、Y9‘8二97分類號(hào)UDC密級(jí)編號(hào)學(xué)位論文大鼠肌肉素基因克隆、融合表達(dá)及多克隆抗體制備lneC10nlnganQrUSlOneXpreSSlOnO士mUSClln士rOmratand1)rel)aratlOnOtltSDOlVClOnalantlDOQV裘梁指導(dǎo)教師姓名：王曼瑩教授、鏖志勇耐教授江西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院：申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)名稱：‘有機(jī)化學(xué)：，論文提交日期：2006年4月15日論文答辯丑期：2006年5月、學(xué)位授予單位

2、和日6期：江蘑師范大學(xué)2006年月答辯委貫會(huì)主席：評(píng)閱人’：二OO六年月大鼠肌肉素基因克隆、融臺(tái)表達(dá)及多克隆抗體制備摘要肌肉素是肌細(xì)胞特異分泌的多肽蛋白質(zhì)，參與機(jī)體糖代謝和脂代謝。肌肉素作為一種自分泌和旁分泌因子在骨骼肌中起作用，其mRNA幾乎只在骨骼肌中表達(dá)，并受營養(yǎng)條件和激素因子尤其是胰島素的調(diào)控，在肥胖的患有胰島素抵抗的小鼠骨骼肌中，肌肉素的mRNA表達(dá)水平相對于正常小鼠較高，而肌肉素蛋白能抑制由胰島素引起的葡萄糖吸收和糖原合成，

3、由此推測肌肉素可能與糖尿病的發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系。論文進(jìn)行了原核表達(dá)并純化肌肉素，制各肌肉索的多克隆抗體，為深入了解刪鐘J加基因的功能及其臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。本文從大鼠的骨骼肌中提取總RNA，用RT—Pc方法克隆到肌肉素的cDNA，將肌肉素基因片段插入含GsT標(biāo)簽的融合表達(dá)載體pGEx5x一3中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEx一5x一3一刪占口J如進(jìn)行測序，測序結(jié)果與Genebank中的進(jìn)行同源性比對，DNA序列的相似度為9925％，所編碼的蛋白

4、質(zhì)的氨基酸序列相似度為100％將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，并用I盯G誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化菌表達(dá)目的蛋白，sDs—PAGE鑒定該轉(zhuǎn)化菌表達(dá)了37kDa，并用免疫印跡分析證明該蛋白為GsT～Musclin重組蛋白。經(jīng)表達(dá)形式分析證明，融合蛋白小部分可溶，用GsHSepharoseResin進(jìn)行純化后，免疫日本大耳白兔制備多克隆抗體，利用問接ELIsA法和westernblot檢測該重組蛋白能有效地誘導(dǎo)日本大耳白兔產(chǎn)生高水平的特異性IgG