海洋荔枝螺及幾種植物源天然產(chǎn)物抗癌活性研究.pdf

1、荔枝螺為福建海域常見(jiàn)的食用螺類，可入藥，由于自然分布的地域性，國(guó)內(nèi)外對(duì)其生物活性物質(zhì)的研究還較少，本論文以海洋荔枝螺為研究材料，對(duì)其活性物質(zhì)的提取分離以及抗癌活性的研究進(jìn)行了探討，試圖解釋其抗癌活性機(jī)制及物質(zhì)基礎(chǔ)，為海洋天然產(chǎn)物的提取分離純化方法以及其抗癌活性篩選及機(jī)制研究提供參考，對(duì)海洋來(lái)源的天然藥物研究具有重要意義。
　　本研究以荔枝螺為研究材料，用有機(jī)溶劑浸提法對(duì)其活性成分進(jìn)行提取，并用薄層色譜、硅膠柱層析以及制備型液相色譜

2、進(jìn)行分離純化，通過(guò)細(xì)胞增殖檢測(cè)、細(xì)胞凋亡壞死檢測(cè)、線粒體膜電位檢測(cè)以及PARP蛋白的剪切等手段分析細(xì)胞水平的抗癌活性，解釋其抗癌機(jī)制。經(jīng)過(guò)硅膠柱層析對(duì)荔枝螺提取物進(jìn)行初步分離得到的組分EA-2用CCK-8溶液檢測(cè)證明其對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7、肝癌細(xì)胞QGY-7703的增殖具有顯著抑制作用，當(dāng)藥物濃度高于40μg/ml時(shí)，兩種癌細(xì)胞存活率顯著下降（＜56％），EA-2對(duì)MCF-7和QGY-7703的IC50分別為28μg/ml和46μg/

3、ml。EA-2使乳腺癌細(xì)胞MCF-7線粒體膜電位顯著下降，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生凋亡式變化，凋亡細(xì)胞的數(shù)量顯著增加，同時(shí)能夠使肝癌細(xì)胞QGY-7703發(fā)生PARP蛋白剪切，加入泛Caspase抑制劑后細(xì)胞存活率增加，說(shuō)明其對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用主要是通過(guò)致凋亡的方式實(shí)現(xiàn)的。最后通過(guò)硅膠柱層析以及制備型高效液相色譜等方法對(duì)活性組分進(jìn)一步分離純化，得到高純度化合物（98%），通過(guò)核磁共振、質(zhì)譜等對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，證明其為6-溴靛紅。大多數(shù)的天然藥物來(lái)源于

4、陸生植物，因其安全、毒副作用小的特性受到人們廣泛關(guān)注，本實(shí)驗(yàn)對(duì)21種植物來(lái)源的化合物進(jìn)行了抗腫瘤活性篩選，并用同樣方法對(duì)其抗癌活性機(jī)制進(jìn)行了初步探討。21種化合物作用于人膀胱癌細(xì)胞T24和KU-19-19，篩選出能夠抑制細(xì)胞增殖的藥物，然后通過(guò)細(xì)胞增殖、凋亡壞死、線粒體膜電位等檢測(cè)手段對(duì)其抗腫瘤活性進(jìn)行進(jìn)一步的分析。篩選結(jié)果顯示葫蘆素B對(duì)T24細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，通過(guò)進(jìn)一步的分析，葫蘆素B能夠使癌細(xì)胞形態(tài)明顯改變，經(jīng)Hoechs