腺病毒介導(dǎo)的IL-28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對(duì)U14宮頸癌皮下移植瘤小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響及抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的：
　　1.構(gòu)建小鼠U14宮頸癌皮下移植瘤模型，評(píng)價(jià)腺病毒介導(dǎo)的白介素28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對(duì)小鼠宮頸癌移植瘤的影響及其抗腫瘤作用的研究。
　　2.應(yīng)用克隆技術(shù)將IL-28B的基因序列構(gòu)建于真核表達(dá)載體上。
　　方法：
　　1.(1)培養(yǎng)小鼠U14宮頸癌細(xì)胞及HEK293細(xì)胞；(2)利用HEK293細(xì)胞對(duì)Ad-IL-28B及Ad-EGFP擴(kuò)增；采用CPE法測(cè)定Ad-IL-28B及Ad-EGFP的滴度；(3)建

2、立Babl/C小鼠U14的宮頸癌的腹水模型，抽取腹水進(jìn)行皮下移植瘤的種植；(4)待移植瘤直徑達(dá)3mm應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行完全隨機(jī)分配成5組，包括IL-2、Ad-mIL-28B、3-溴丙酮酸、3-溴丙酮酸+Ad-mIL-28B、Ad-EGFP及PBS組，觀察移植瘤的大小變化，并計(jì)算其抑瘤率；(5)20天后處死，分離實(shí)驗(yàn)小鼠的脾臟，將各組小鼠的脾臟進(jìn)行研磨，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟中的細(xì)胞因子CD4+CD25+FoxP3+Tregs的

3、變化情況。
　　2.通過(guò)分子克隆技術(shù)，構(gòu)建真核表達(dá)蛋白Ppic9k-IL-28B，使其在BMMY培養(yǎng)基中穩(wěn)定表達(dá)并優(yōu)化蛋白表達(dá)條件。
　　結(jié)果：
　　1.腺病毒介導(dǎo)的白介素28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對(duì)小鼠宮頸癌移植瘤的治療作用。（1）采用CPE法測(cè)定Ad-mIL-28B以及Ad-EGFP的滴度均為108PFU/100ul。（2）成功建立了實(shí)驗(yàn)小鼠的腹水模型及皮下移植瘤模型。(3) Ad-mIL-28、IL-2、3-溴丙酮酸

4、、3-溴丙酮酸+Ad-mIL-28B組處理后的實(shí)驗(yàn)小鼠的脾臟中的CD4+CD25+FoxP3+Tregs在淋巴細(xì)胞中所占比例分別為7.66％、5.69%、6.63%、2.64%，三溴丙酮酸+Ad-mIL-28B組與PBS組相比明顯減少。（4）Ad-mIL-28、IL-2、3-溴丙酮酸、3-溴丙酮酸+Ad-mIL-28B組的腫瘤抑瘤率分別為59.18±16.89、62.57±16.28、75.28±3.37、79.23±3.82，3-溴丙

5、酮酸+Ad-mIL-28B組小鼠的抑瘤率明顯高于PBS組。
　　2.（1）成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒Ppic9k-IL-28B。（2）建立了重組質(zhì)粒Ppic9k-IL-28B的表達(dá)方法。
　　結(jié)論：
　　1.腺病毒介導(dǎo)的白介素28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對(duì)Treg細(xì)胞因子有下調(diào)的作用。腺病毒介導(dǎo)的白介素28B聯(lián)合3-溴丙酮酸對(duì)小鼠移植瘤有抑制作用。
　　2.將IL-28B導(dǎo)入Ppic9k表達(dá)載體后，畢赤酵母GS115表達(dá)菌接受