siRNA運(yùn)輸載體的制備和活性評價(jià).pdf

1、自RNAi發(fā)現(xiàn)以來，它已經(jīng)得到了很廣泛的應(yīng)用，并且隨著其設(shè)計(jì)的不斷改善，RNAi可以在任何基因中發(fā)揮沉默作用?；瘜W(xué)合成的siRNA是目前比較常用的沉默試劑，但是由于它表面帶有大量的負(fù)電荷，較大的分子量和不穩(wěn)定性易被核酸酶降解掉，所以它不能自己進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮沉默功能，因此需要載體協(xié)助它進(jìn)入細(xì)胞。在我們的實(shí)驗(yàn)中，我們采用一段融合肽作為siRNA的載體，一端是D型9R，借助它表面的正電荷與帶有負(fù)電荷的siRNA通過靜電吸引作用結(jié)合在一起；另一

2、端是具有內(nèi)吞功能的環(huán)狀9肽iRGD，它發(fā)揮內(nèi)吞功能需要細(xì)胞表面同時(shí)表達(dá)整合素αvβ3或αvβ5和neuropilin-1，前列腺癌細(xì)胞22Rv1同時(shí)表達(dá)這兩種結(jié)構(gòu)。凝膠延滯結(jié)果表明siRNA：9R-iRGD(9R)在1:30時(shí)可以將siRNA完全結(jié)合；沉默持家基因GAPDH的結(jié)果中，RT-PCR顯示9R-iRGD優(yōu)于9R但是低于Liposome2000；western blotting結(jié)果表明各載體之間沒有明顯差異；9R-iRGD與9R