羊急性心梗卸負(fù)荷模型的miRNA表達(dá)譜.pdf

1、目的:
　　心肌細(xì)胞因缺乏再生能力，遇到缺血缺氧等多種原因?qū)?dǎo)致心肌細(xì)胞損傷，造成心肌細(xì)胞丟失、纖維組織增生，引發(fā)心室重構(gòu)，并逐漸進(jìn)展成心力衰竭。左心室循環(huán)輔助裝置(LVAD)已經(jīng)被證明是治療心力衰竭的有效手段，使用LVAD進(jìn)行機(jī)械循環(huán)支持可以通過對(duì)衰竭的左心室卸負(fù)荷的方式帶來有利的影響。然而，LVAD在急性心肌梗死治療的應(yīng)用還需進(jìn)一步研究論證，LVAD對(duì)AMI后期的預(yù)后及其機(jī)制有待進(jìn)一步闡明。
　　微小RNA(miRNA，

2、miRNA)是一種21-23個(gè)堿基組成的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。MiRNA參與多種病理生理學(xué)過程。目前miRNAs在心肌缺血中的功能與機(jī)制研究尚處于起步階段，尤其是有關(guān)心肌缺血早期miRNAs改變的報(bào)道較少。也沒有在AMI早期采取LVAD干預(yù)后，對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)部miRNA的分析，及其相關(guān)信號(hào)通路的研究。本文試圖在羊急性心梗模型上建立miRNA表達(dá)譜，為L(zhǎng)VAD治療急性心梗提供理論依據(jù)。
　　方法:

3、
　　1、成年小尾寒羊經(jīng)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈制作心梗模型，心臟不停跳植入FW-2型軸流泵，分別為對(duì)照組和卸負(fù)荷組。
　　2、模型建立后，進(jìn)行心電圖檢測(cè)，同時(shí)置入Swan-gaze漂浮導(dǎo)管進(jìn)行檢測(cè)記錄。
　　3、72小時(shí)后，分別取對(duì)照組和卸負(fù)荷組的心肌組織，分為正常區(qū)域，梗死邊帶區(qū)域以及梗死區(qū)域，進(jìn)行組織染色法。
　　4、TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞的凋亡情況。
　　5、高通量測(cè)序技術(shù)建立miRNA表達(dá)譜。
　　6

4、、比較對(duì)照組和卸負(fù)荷組相應(yīng)區(qū)域心肌中差異表達(dá)的miRNA。
　　7、PCR對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　8、驗(yàn)證后對(duì)差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行功能和信號(hào)通路分析。
　　結(jié)果:
　　1、對(duì)照組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行7只，其中3只造模成功。LVAD組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)共有5只，其中3只成功。
　　2、HE染色結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，卸負(fù)荷組心肌細(xì)胞破壞減弱，同時(shí)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少。Masson染色結(jié)果顯示卸負(fù)荷組膠原化面積減小，心肌細(xì)

5、胞保留較多。天狼猩紅染色結(jié)果顯示卸負(fù)荷組膠原化明顯減輕;對(duì)比梗死區(qū)域，卸負(fù)荷后主要是Ⅲ型膠原，而對(duì)照組則主要是Ⅰ型膠原。
　　3、TUNEL結(jié)果顯示心梗卸負(fù)荷后，心肌細(xì)胞凋亡明顯減弱。
　　4、卸負(fù)荷組與對(duì)照組相比，心梗區(qū)域差異表達(dá)的miRNA是oar-miR-19b（上調(diào)）;梗死邊帶區(qū)域差異表達(dá)的miRNA有3個(gè)，其中下調(diào)的是oar-miR411b-5p和oar-miR-487a-5p，上調(diào)的是oar-miR-26a。

6、r>　　5、PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示oar-miR-19b(P＜0.05)和oar-miR-26a(P＜0.01)在卸負(fù)荷組與對(duì)照組中表達(dá)有明顯差異，與芯片結(jié)果相符。
　　6、GO和KEGG分析結(jié)果顯示oar-miR-19b和oar-miR-26a所涉及到的功能和信號(hào)通路均與心血管疾病有密切的關(guān)系。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)利用FW-2型軸流泵成功地對(duì)急性心梗的羊進(jìn)行了3天的循環(huán)輔助，證實(shí)LVAD可有效減輕心梗程度。成功地建立